蛋白质纯化色谱技术.pptxVIP

第四讲蛋白质纯化色谱技术一、色谱技术概述二、凝胶过滤色谱（GF）三、离子交换色谱（IEX）四、疏水色谱（HIC）五、反相色谱（RPC）六、亲和色谱（AC）一、色谱技术概述色谱法，层析法，色层法（Chromatography）是一种 “分离＋检测” 的“定量＋定性” 分析方法1903－1906 俄国科学家Tswett发明分类：色谱分离方法很多，种类有四、五十种 ——按大类分类法： 液相色谱（Liquid Chromatography） 气相色谱（Gas Chromatography） ——按原理分类法： ——按形式分类法： ——按工作压力分类法： 色谱技术（分配色谱）概念： 色谱技术是一组相关分离方法的总称，色谱柱的一般结构含有固定相（分离介质）和流动相，根据物质在两相间的分配行为不同（由于亲和力差异），经过多次分配（吸附-解吸-吸附-解吸…），达到分离的目的。基本组成流动相色谱图进样器分离柱检测器泵输液进样分离检测数据记录输液泵流速压力精度脉冲保养梯度形成 进样位置流动相废液样品接色谱柱手动（六通阀）进样器采样位置进样阀（ＬＯＡＤ）（ＩＮＪＥＣＴ）流动相废液样品接色谱柱定量环层析柱（填料/介质）分离的关键场所使用方法不同，先查阅说明书注意清洗保养防止气泡进入样品及缓冲液的预处理保湿填料（层析介质）分离官能团；基质骨架；粒径/分辨率；蛋白质实验技术－层析纯化层析柱监测器紫外监测器