哺乳动物dna的快速分离与pcr扩增.pptxVIP

;一、 实验目的 1、了解真核细胞中基因组结构与组成的复杂性；学会 并掌握从哺乳动物组织中提取基因组总DNA的原理 与技术，为PCR分析，RFLP分析，基因文库的构 建，基因探测等的研究打下基础； 2、学习与掌握PCR扩增基因的原理和操作方法，了解 PCR基因扩增技术在分子克隆，目的基础检测，遗 传病的基因诊断，法医学，考古学等方面的应用。;二、实验原理;模板DNA在94℃条件下变性形成单链； 在55℃条件下根据目的基因两侧序列设计的引物分别与其同源序列结合；70℃下在耐热性DNA聚合酶Taq 酶催化下， 在４种dNTP存在条件下延伸形成双链。完成一次循环。 接着又以新合成的DNA为模板进行同样反应，如次往复循环30次，由于每次循环目标DNA都以２n次幂扩增，30次循环后目的DNA的量增加106～7倍。成功的PCR反应要求反应有很好的特异性，和相当的扩增效率。 要达此目的PCR反应要注意以下问题： ①、 DNA模板：反应中DNA量在50ng～200ng左右。且DNA纯度 较高，以增加反应特异性。 ②、dNTP:反应体系中达100μM～200μM。;③、Mg2+：Mg2+是Taq酶的辅基浓度在2.0mM左右，浓度太低Taq 酶活力降低；太高反应特异性降低； ④、引物：根据目的基因两侧特定序列设计。引物约20碱