培养基的制备和高压蒸汽灭菌.pptxVIP

培养基的制备和高压蒸汽灭菌2007.11目的与要求1、了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程。2、学习高压蒸汽灭菌操作技术。3、初步掌握划线和涂布平板的技术。4、了解抗生素对细菌的抑制作用。实验流程抑菌圈实验划线、涂布平板灭菌、倒平板配培养基培养基培养基（medium)：由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。 在微生物学研究和生长实践中，配置合适的培养基是一项最基本的要求。任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理天然培养基合成培养基半合成培养基按化学成分来分类固体培养基液体培养基半固体培养基脱水培养基培养基按物理状态来分类基础（本）培养基营养（加富）培养基完全培养基选择培养基鉴别培养基按功能进行分类培养基的配制过程10g/L 蛋白胨3g/L 牛肉膏计算用量:200ml固体培养基称量：托盘天平溶解：自来水调pH：自然pH灭菌：一般培养基， 121 0C, 15-30min：20min；含糖培养基： 112 0C, 15-30min；易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合倒平板5g/L NaCl2% 琼脂粉灭菌灭菌（Sterilization）是指利用物理、化学等手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。化学药品灭菌辐射灭菌灭菌方法过滤除菌火焰灼烧干热灭菌热空气灭菌加热法煮沸消毒法常压蒸汽灭菌法湿热灭菌高压蒸汽法高压蒸汽灭菌锅的构造Be careful!高压蒸汽灭菌锅的使用待灭菌物品的包扎Attention!装锅、加水加盖 （对角线均匀拧旋）开锅取物升温、排气（放大气5min）121℃20min切断电源、冷却恒温倒平板 融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准)平板划线的基本程序杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本灭菌接种环沾取菌液接种杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境灭菌接种环连续划线法三角铁扒平板涂布的基本程序灭菌过的移液管吸取菌液0.1ml滴在培养皿中央用灭菌的涂布棒均匀涂布：将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀，然后改变方向沿另一垂直来回推动，平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。青霉素滤纸片涂布好的平板抑菌圈实验Ready? GO!每组4人需要灭菌的东西：固体培养基200ml（2g蛋白胨，0.6g牛肉膏，1gNaCl，4g琼脂，自来水200ml，自然pH）培养皿10个（每人倒平板两个，一个划线，一个涂布；涂布的那个用于抑菌圈实验）1ml移液管4支(每人1支）滤纸片，每人两片，每组需剪10片，装入培养皿中灭菌思考题1、总结一下，配制培养基应注意哪些问题。2、高压灭菌的关键是什么？3、加入青霉素滤纸的涂布平板究竟会产生什么样的效果，为什么？Game Over!具体操作步骤：（1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。（2）放入需要灭菌的东西。注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。（3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）（4）打开放气阀，打开电源，自开始产生大气后5分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽），关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（即温度上升到121℃），控制热源维持所需时间（20分钟），然后停止加热，让其自然冷却。注意：应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽。（5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。分离、鉴定、计数、保藏等（固体）观察微生物的运动、分类鉴定及噬菌体效价测定等（半固体）工业大规模发酵生产及实验室生理、遗传等基础理论研究（液体）是根据作用划分的。用于鉴别的培养基，比如在鉴别固氮菌时，培养结里不加氮源，即为鉴别固氮菌的培养基 凡满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。 （完全培养基）应用能杀死微生物的化学制剂进行灭菌的方法：医疗卫生、环境保护、食品、生物制品应用物理射线进行灭菌的方法：无菌室、实验台等物体表面应用过滤介质进行灭菌的方法：血清、抗生素、糖等不耐热的的液体应用高温进行灭菌的方法平板的制作应在酒精灯火焰旁进行，右手掌心握住三角瓶的底部，左手打开三角瓶棉塞，以右手的无名指和末指夹持瓶塞，灼烧瓶口。左手拿培养皿，用左手的大拇子将皿盖掀开一缝，至瓶口刚好伸入，向皿内注入培养基（约15 ml，厚度约0.5 mL左右），迅速盖好皿盖。 左手持培养皿稍加旋转摇动，使培养基均匀分布于整个培养皿底部，然后平置于桌面水平位置,待凝后即为平板。