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植化方法学(一);植化方法学涉及内容;如何开展研究-注意点;植化方法学（一） （各种色谱的分离原理及操作）;一、硅胶相关色谱;植化方法学（一） （各种色谱的分离原理及操作）;2、分离原理 吸附作用：氢键作用、偶极作用和静电作用等 吸附强度的大小取决于硅醇基类型、硅醇基数目（比表面积）、孔体积、平均孔径 3、使用范围 由于硅胶的弱酸性、往往适合于分离黄酮、香豆素、蒽醌、萜、甾体等中性或弱酸性类化合物。;;黄连生物碱的化学结构;薄层板： 硅胶G薄层板， 110 ?C 活化1小时 展开剂： 乙酸乙酯-氯仿-甲醇-浓氨水-二乙胺 （8:2:2:1:0.5） 检测方式：UV366nm;4、常用硅胶的规格 100~140目、100~200目（75~150?m）、200~300目（45~75 ?m ）为开放柱色谱用硅胶 10~40?m为薄层色谱用硅胶 2~10 ?m为高效薄层色谱或液相色谱用硅胶 5、薄层色谱硅胶的种类 硅胶G:含有石膏12~14%，粒度10~40?m，pH6~7(10%)。 硅胶H:不含石膏，pH6~7(10%)。 硅胶GF254:含有石膏12~14%，pH6~7(10%)，且含有少量的荧光剂。;6、硅胶含水量与活性之间的关系;细玻璃管法测定硅胶活性 展开剂：苯;7、含水硅胶色谱 硅胶含水达17%以上为分配色谱，适宜分离生物碱、糖类、皂苷、有机酸等。表现在薄层和开放柱上，展开剂或洗脱剂为多相含水系统。;;Oleanane-type and Protopanaxatriol-type Saponins from Panax ginseng;Panaxadiol-type Saponins from Panax ginseng;;4)、标记色带 取出薄层板，晾干，根据荧光画出色带，或部分显色确定色带的位置。 5)、剥离、提取 剥离色带部分的硅胶，以合适的溶剂直接提取或装入小玻璃柱进行洗脱。（忌用含水系统处理） 6)、浓缩 浓缩提取液或洗脱液得色带对应的化合物。多数情况下，需要进一步的精制或纯化处理。;制备薄层色谱展开后处理; 9、硅胶柱色谱的操作（开放柱色谱） 1)、拌样（干法上样）： 将分离样品溶于易挥散溶剂中，与三倍量的柱层析硅胶拌样。滴加样品溶液的同时应不断搅拌均匀，一旦达到制剂软材程度应停止滴加样品溶液，晾干或低温干燥（注意有毒溶剂的处理）后再继续操作，直到样品溶液全部加入。 2)、装柱： 将拌样硅胶10~20倍量的柱色谱硅胶浸泡于起始溶剂中，搅拌赶出气泡，装入准备好的玻璃柱中，平衡至不再下降为止。 3)、上样： 待硅胶柱平衡好后，将干燥好的拌样硅胶用漏斗加入柱子上部（加入前要保证起始溶剂在柱子中足够的高度以免带入气泡）。 4)、加入保护硅胶或棉花：用起始溶剂洗脱至柱中上端溶剂颜色变浅或无色为止，然后加入适量硅胶或棉花起缓冲作用。;5)、柱色谱洗脱剂的选择 起始溶剂原则上对被分离样品中的任何物质都没有洗脱能力。洗脱溶剂的选择以硅胶薄层板的色谱行为为先导，被分离成分的Rf值一般在0.1~0.2为宜（理论上为0.2~0.3）。;“注”：展开剂和洗脱剂的选择最好参考文献资料。 6)、更换洗脱剂 在一个洗脱剂系统下，一般要求至少洗脱3~5个保留体积，实验中可根据具体情况决定是否更换，比如到5个保留体积还有较大量的的物质被洗脱下来，就应当继续洗脱下去。 7)、保留体积的估算 浸泡硅胶的溶剂量 + 空柱溶剂量–柱床上端溶剂量 =保留体积 8)、流速的提高：柱上端加压或下段流出口减压，特别是填料硅胶粒度小时可采用这两种方式加快洗脱速度。 9)、合并相同流份：硅胶薄层色谱指导合并，流份体积根据硅胶柱大小和分离样品量确定。;10、硅胶中低压柱色谱及高效液相色谱;11、硅胶干柱法（适用于有颜色或荧光的物质分离） 干柱色谱的优点： 1)、分离效果比湿装柱高。 2)、洗脱液的选择可直接套用薄层色谱的最佳分离 条件。 3)、常采用塑料薄膜柱，对有荧光或颜色的物质， 可借助紫外灯分割各色带，避免交叉。 4)、适用于制备性分离。 5)、设备简单，消耗溶剂少，节省时间。;硅胶干柱法的操作;4)、分割： 根据色带或荧光带做好标记，然后用弯勺取出各标记带对应的硅胶（玻璃柱），塑料薄膜柱可直接切割。 5)、洗脱： 用合适的溶剂提取色带或荧光带硅胶，也可装入小玻璃柱用溶剂洗脱下来。 “注意点”： a ：上样量比正常的硅胶柱色谱要少，一般1:100~1:30