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实验2.蛋白质性质实验;一、蛋白质等电点的测定;实验原理; 调节氨基酸溶液的pH,使氨基酸分子上的—+NH3基和—COO-基的解离程度完全相等时,即所带净电荷为零,此时氨基酸所处溶液的pH值称为该氨基酸的等电点(pI)。 ; 蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡; 蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度的影响。当溶液的pH达到一定数值时,蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等,在电场中,蛋白质既不向阴极移动,也不向阳极移动,此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点PI。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时,蛋白质的理化性质都有变化,可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。本实验借观察在不同pH值溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。;二、蛋白质沉淀及变性;(二)实验原理;(三)蛋白质的沉淀类型:
1.可逆沉淀:此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化,除去引起沉淀的因素后,蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中,并保持其天然性质而不变性。
2.不可逆沉淀:此时蛋白质分子内部结构发生重大改变,蛋白质常变性而沉淀,不再溶于原来溶剂中。
蛋白质变性后,有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在(如电荷),蛋白质并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
;几种沉淀蛋白质的方法;酪蛋白等电点测定;乙醇引起的变性与沉淀 ;思考
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