液质联用分析实讲义-2019.pdfVIP

实验一 液质联用分析 一、实验目的 1. 了解液相色谱仪和质谱仪的原理、基本构造。 2. 了解、熟悉质谱基本操作技术及质谱检测器的基本组成及原理。 3. 了解采集方法的编辑，掌握LC 各模块和QQQ 采集参数优化及设置。 4. 熟悉定性分析软件，能从所得的质谱图中指认出相应物质对应的质荷比， 能对谱图做定性的描述。 二、实验原理 1. 液相色谱-质谱联用 （Liquid Chromatography/Mass Spectrometry ，LC-MS ） 液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS ）将应用 范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质 谱法结合起来，已成为一种重要的现代分离分析技术。色谱分析是运用物种在固定 相和流动相两相间的分配系数不同而达到分离的效果的一种分离技术，主要目的是 对混合物中目标产物进行分离和定量的一种分析技术。质谱是通过测定样品的质荷 比来进行分析的一种方法。通过液-质谱联用(LC-MS)技术可实现样品的分离和定量 分析，达到快速灵敏的效果。 2. 液质联用系统的组成部分 液质联用系统包括 HPLC （色谱分离）、 液质接口（样品引入）、离子源（离 子化）、 质量分析器、检测器（离子检测）和真空系统等。 本实验采用ESI 离子源的三重四级杆质量分析器 （如图1，Q1-质量分析器； Q2-碰撞室；Q3-质量分析器）为低分辨率质量分析器，其质量分析器由四根棒状电 极组成，形成一个四极电场，该电场只允许一种质荷比的离子通过，通过四极杆的 离子到达检测器被检测，其余离子则振幅不断增大，最后碰到四极杆而被吸收。质 谱仪的检测主要使用电子倍增器，由四极杆出来的离子打到高能打拿极产生电子， 电子经电子倍增器产生电信号，记录不同离子的信号即得质谱。 图1 三重串联四极杆质谱的系统结构图示意图 两个四极杆在空间上串联起来，在分析测试的模式上多了以下选择： 子离子扫描（Product Ion Scan ）：MS1 使用SIM 方式选择某一个或多个特定 质荷比的母离子通过四极杆1，在碰撞池施加碰撞能量产生碎片离子，然后在四级 1 杆 2 中进行扫描分析。此过程可以产生典型的质谱/质谱碎片谱图。三重串联四极 杆通过这种工作方式可以得到待分析物质的二级质谱图，从而帮助确定在做多反应 监测时使用的定量离子和定性离子。 母离子扫描 (Precursor Ion Scan)：第一个质量分析器扫描电压选择母离子（如 分子离子），进入碰撞室碰裂后，第二个质量分析器固定扫描电压，只选择某一特 征离子质量，该特征离子是由所选择的母离子产生的，由此得到所有能产生该子离 子的母离子谱。主要用于同系物的分析。实例：（Q1 = 100-300 m/z ；Q3 = 259 m/z ） 中性丢失扫描 (Netural Lost Scan)：第一个质量分析器扫描所有离子，所有离 子进入碰撞室碎裂后，第二个质量分析器以与第一个质量分析器相差固定质量联动 扫描，检测丢失该固定质量中性碎片（如质量数 15、18、45 ）的离子对，得到中 性碎片谱，主要用于中性碎片的分析。实例：（Q1 = 100-300 m/z ；Q3 = 82-282 m/z ） 多反应监测 (MRM，Multiple Reaction Monitoring) ：MS1 采用SIM 方式选 择某个或多质荷比的母离子，在碰撞池施加碰撞能量产生碎片离子。MS2 同样采 用 SIM 方式来监测由母离子产生的一个或几个特定子离子。这就是多反应监测 （MRM ）。这种方式可以极大提高检测灵敏度和定量准确性，是三重串联四极杆仪 器最主要的使用方式。 三、仪器与试剂 Agilent 液相色谱-三重四级杆质联用仪（LC-MS/MS,1290II-6460 ） 甲醇 （色谱纯）； 乙腈（色谱纯）； 待测样品：化合物A （正离子模式，m/z=264 ）；化合物B（正离子模式，m/z= 195 ）。 液相条件：流动相为乙腈和水（含 0.1% 甲酸和