基因工程lecturednacloning剖析.pptVIP

Genetic Engineering;5.1 Strategy and protocols for DNA Cloning;基因克隆;基因克隆的技术路线;5.2 目的基因的来源;把DNA分子切割或连接成易于与载体连接的片段。 单酶切和多酶切； 完全酶切和部分酶切； DNA片段的回收。 ;Partial restriction digestion;微型凝胶电泳 DEAE纤维素膜 吸附法 低融点凝胶法 离心柱层析;5.4.1 外源DNA片段与载体DNA片段的三种连接方式;5.4.2 同源粘性末端间的连接;5.4.2 同源粘性末端间的连接;同一种内切酶生产的粘性末端的连接;13;14;;5.4.4定向克隆的技术路线 ;5.4.5 DNA末端的修饰改造;5.4.5 DNA末??的修饰改造;19;3. 人工接头(linker)连接 由平端加上新的酶切位点，再用限制酶切除产生粘性末端，而进行粘端连接。 人工合成的、含有限制性内切酶识别序列的、短的双链DNA片段。 4. DNA插口技术(adaptor)：人工合成的、具有粘性末端寡聚核苷酸。;人工接头及其应用;● 受体细胞(receptor cell) 又称为宿主细胞或寄主细胞(host cell)等，从实验技术上讲是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞;从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞。 ● 感受态(competenc