水处理微生物学--微生物的生长繁殖.ppt

（二）稀释倒平板法 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如10、100、1000、10000倍…），然后分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 （三）单孢子或单细胞分离法 采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个孢子进行培养以获得纯培养。 单细胞分离法的难度与细胞或个体的大小成反比，较大的 微生物如藻类、原生动物容易，个体较小的细菌较难。 对操作技术有比较高的要求，多限于高度专业化的科学研究中采用。 （四）利用选择性培养基分离法 各种微生物对不同的化学试剂、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用这些特性可配制合适某种微生物而限制其它微生物生长的选择培养基，用它来培养微生物以获得纯培养。 另外，还可以将样品预处理，消除不希望分离到的微生物。如加温杀死营养菌体而保留芽孢，过滤去除丝状菌体而保留单孢子。 微生物纯培养分离方法的比较 分离方法 应用范围 平皿划线法 方法简便，多用于分离细菌 稀释倒平皿法 即可定性，又可定量，用途广泛 单细胞挑取法 局限于高度专业化的科学研究 利用选择培养基法 适用于分离某些生理类型较特殊的微生物 测生长量 直接法 间接法 测体积 称干重 含氮量 生理指标法 （耗氧量，酶活性等） 计数器计数法 电子计数器计数法 涂片染色法 直接法 间接法 液体稀释法 平板菌落计数法 比浊法 测微生物数目 三、微生物生长繁殖的测定方法 1、 生理指标法 微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、 生物热等与其群体的规模成正相关。 样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显， 因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量 热计等设备来测定相应的指标。 常用于对微生物的快速鉴定与检测 2、计数器计数法 缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 3、平板菌落计数法 样品充分混匀； 每支移液管及涂布棒只能接触一个 稀释度的菌液； 同一稀释度三个以上重复,取平均值； 每个平板上的菌落数目合适，便于 准确计数； 一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中一般用 菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示，而 不是直接表示为细胞数。 4、液体稀释法 主要适用于只能进行液体培养的微生 物，或采用液体鉴别培养基进行直接 鉴定并计数的微生物。 对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算取三个连续的稀释度 平行接种多支试管，对这些平行试管的微生物生长情况进行统 计，长菌的为阳性，未长菌的为阴性，然后根据数学统计计算 出样品中的微生物数目。 5、比浊法 在一定波长下，测定菌悬液的光密 度，以光密度(optical density, 即O.D.) 表示菌量。 实验测量时应控制在菌浓度与光密度 成正比的线性范围内，否则不准确。 一、培养方法 分批培养：将少量细菌接种于一定量的液体培养基内，在适宜的温度下培养，并定时取样测定活细菌数目或重量的变化。 连续培养：流入新鲜培养基的同时不断流出培养物的培养方式，即一方面连续进料，另一方面又连续出料的培养方式 第二节 微生物的生长曲线 二、细菌的生长曲线 将少量菌种接种在适当的液体培养基中培养，隔一定时间取样，计算菌数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标作图。 典型生长曲线，只适用于单细胞微生物如细菌和酵母菌，对于丝状生长的真菌或放线菌，只能获得非典型的生长曲线 典型生长曲线 细分：停滞期(适应期)、加速期、对数期、减速期、静止期、衰 亡期 粗分：停滞期(适应期)、对数期、静止期、衰亡期。 1. 停滞期 　　 又称适应期，指少量微生物接种到新培养液中后，在开始培养的一段时间内细胞数目不增加的时期。 为什么会出现停滞期呢？ 适应环境（合成相应的酶） 营养储备（用于复制合成） “万事开头难” （一）特点 ① 生长速率常数等于零 ② 细胞形态变大或增长 ③ 细胞内RNA尤其是rRNA含量增高， 原生质呈嗜碱性 ④ 合成代谢活跃 ⑤ 对外界不良条件反应敏感 （二）影响停滞期长短的因素 ① 接种菌龄：接种龄即“种子” 的群体生长年龄，亦即它 处在生长曲线上的哪一个阶段。实验证明，如果以对数期接种龄的“种子”接种，则子代培养物的停滞期就短。 ② 接种量：接种量的大小明显影响停滞期的长短。（基数大） ③ 营养：营养丰