免疫组化4双重或多重标记.pptxVIP

双重或多重免疫组化标记;操作的原则和要求基本上与单标免疫组化方法雷同优点：不同抗原成分位置、功能关系更直观缺点：流程长 脱片机率更高 前后重染色试剂间有交叉干扰;二、技术类型 （一）双重或多重免疫荧光标记染色 采用呈现不同颜色的荧光色素配伍，分别标记不同的抗体，再通过各自与同一切片上的相应抗原特异性结合而加以区别显示所建立起来的双重或多重免疫组化染色技术。;优点：方法敏感、特异 缺点： 需选用各自特定的激发滤光片分别观察或二次曝光显影 样本不能长期保存 组织结构背景不清晰。;直接法---特异、快速 ; 操作举例：垂体腺瘤----ACTH与GH双重免疫荧光标记染色（间接法） (1)石蜡切片，脱蜡，梯度酒精水化，入PBS。;(5)羊抗鼠IgG-TRITC ，避光反应1h。 (6)0.05mol/L TBS(pH7.4)洗 (第一重ACTH-TRITC标记染色已完成)。 (7)切片脱水，二甲苯透明，空气干燥后，置于装有多聚甲醛粉末的密闭容器内，放在80℃烤箱或温箱内以甲醛蒸气固定2～4h，使第一重染色中二抗的抗原结合部位失活。 ;(8)切片以TBS洗 (9)1％ HSA孵育30min (10)抗GH血清(McAb) 1:400，孵育30min ;(15)荧光显微镜下分别以546nm及490nm波