植物细胞的选育与改良.pptxVIP

第三章　植物细胞的选育与改良;;Larkin and Scowcroft(1981)提出把由任何形式的细胞培养所产生的植株统称为体细胞无性系（somaclones），而把这些植株所表现出来的变异称之为体细胞无性系变异（somaclonal variation）;从对生物遗传的影响而言，细胞工程技术本身即包含了双重性：遗传稳定性和变异性。 对于单纯的繁殖技术而言，离体培养的技术操作是细胞或组织或个体的不断复制，因而一般来讲其繁殖群体具有较好的遗传稳定性。 细胞工程还有一类技术操作，其目的就在于创造变异，如体细胞人工突变、基因转移、体细胞融合等。这些离体操作技术，在某种程度上说具有一定的目的性和方向性，可在短期内获得从自然界可能要经过几年乃至上百年的进化才能获得的性状，从而加速生物进化的进程。;第一节　离体培养下的遗传与变异特点;一、离体培养中的遗传稳定性;在准确选择培养方式的前提下，离体无性繁殖可以具有较高的遗传稳定性（Phillip等，1994）。正是基于这一理论，利用离体培养技术建立了多种植物的无性繁殖体系。 离体培养的遗传稳定性表现的另一个方面是，即使发生某些变异，也可以即时淘汰变异。;二、离体培养下变异特点;变异的普遍性;;与有性重组相比，体细胞突变性状具有一定局限性 　－从表型上看，在不同植物类型中经常发生的变异主要是植株形态（株高、叶形、叶色等）、生长势、育性、某些抗性等性状的变异。 　－从生理生化特性上看容易出现同功酶谱、次生代谢的消长等变异。;嵌合性： 体细胞变异常以嵌合体的形式存在。 嵌合体可能不同倍性的形式也有其它类型。 嵌合体必须通过分离培养才能纯化。;三、影响体细胞遗传与变异的因素;供体植物－－遗传背景;;供体植物－－生理状态;培养基－－激素;培养基－－物理状态;培养类型;继代次数;;菖蒲属、海芋属、魔芋属、天南星属;第二节 植物细胞的筛选;一、细胞筛选的方法;例一：在长春花的愈伤组织培养过程中，得到不同颜色的组织块，将它们分开继代培养，3周后测定不同细胞株系的长春质碱的产量，发现白色细胞株系产量最高，以白色株系为原株进行紫外诱变，选择压为色氨酸乙酯盐酸盐，??为长春质碱合成的前体物主要有色氨酸和甲瓦龙酸，色氨酸乙酯盐酸盐是色氨酸的结构类似物，筛选得到抗色氨酸乙酯盐酸盐突变株，其中一株长春质的产量增加2.7倍。;例二：采用小细胞团筛选法，筛选花色苷含量高的玫瑰茄细胞系，获得一株高产细胞，用其进行液体悬浮培养，花色苷含量和产量分别比对照提高了14.5倍和16倍。 例三：将黄连的幼叶切块诱导出愈伤组织，选择较松散的愈伤组织转入液体悬浮培养，获得游离细胞和细胞聚集体。经60Co、γ射线辐射诱变和平板培养，筛选出小檗碱含量相当于6年生亲本植物根茎含量的有8个细胞系，最高的细胞系含量为6.12%。;花色苷含量高的玫瑰茄细胞系筛选;(3)平板培养 悬浮培养至对数生长期的玫瑰茄细胞过250μm铜网，单细胞得率为85.37%，2～3个细胞小团率为8.95%，4～8个细胞小团占5.68%。调整细胞密度，取一定量的细胞悬液与冷却至35℃以下的B5固体培养基混匀，铺于9cm培养皿平板。培养条件同上。植板率(PE%)以培养20 d平板上出现的细胞团数占植板细胞总数的百分数来计算。 (4)小细胞团培养 采用B5培养基。于玫瑰茄愈伤组织的高色素区选择色深且颜色均一的小细胞团置于9cm平板上，每板放置16小团，密封。培养条件同前。20 d后转接于50 mL三角瓶中，进行继代培养。;(5)花色苷含量、产量的测定：培养细胞收获，低于40 ℃干燥至恒重，称重。取湿细胞1 g，用1% HCl甲醇溶液于4 ℃浸提24 h，然后测定花色苷含量。将色素含量乘以培养物产量即得花色苷的产量。结果为三次重复试验的平均值。 (6)根据花色苷含量和产量测定结果，选择出高含量和产量的细胞，继代培养，获得高产细胞系。;;2、选择压力筛选法;负选择法也叫富集选择法，经过诱变剂处理后的细胞需要及时进行选择。在最低培养基上，与未突变的细胞相比，突变细胞往往会被淘汰，选择的对象是在一定选择压的作用下不能生长的那些细胞，而能够生长的细胞受到选择。 适用于对营养缺陷型突变体（通过互补作用对于体细胞杂种的选择具有重要价值）的选择。 ;例：负选择法分离烟草营养缺陷型突变体;二、影响细胞筛选效果的因素;2、培养方式对细胞筛选效果的影响;（2）、细胞悬浮培养方式：细胞生长较为迅速，但细胞团大小不一，过大者由于其内、外层细胞所处的环境差别较大，所受到的选择压力可能不同，不利于优良细胞的筛选。 方法：可用适当孔径筛网过滤，以除去较大的细胞团。细胞悬浮培养往往与细胞固体培养结合起来，以达到较好的筛选效果。 （3）、原生质体培养物：理论上讲是用于筛选突变体的最理想材料。可从植株或细胞培