兽医免疫学-实验九（1）疑似病例的诊断—综合.ppt

现有一疑似新城疫病毒和（或）禽流感病毒感染的病鸡，请你用实验室检测技术对其进行确诊。 实验九 疑似病例的实验室诊断 一、鸡胚接种 病毒培养的宿主系统： 本动物 实验动物：家兔、小白鼠、大白鼠、豚鼠、鸡胚 体外培养的器官、组织细胞 疑似病例的实验室诊断 鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，病毒易于增殖，可选择不同的日龄和接种途径，感染病毒的组织和液体中含大量病毒。 材料1、鸡胚 10日龄2、病毒（或病料） 3、照蛋灯4、打孔器5、注射器6、石蜡7、蛋座8、酒精棉球、碘酊棉球 鸡胚的结构与功能 卵壳 壳膜 气室 绒毛尿囊膜 尿囊腔 内含有尿囊液 受精卵的选择 最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 受精卵的壳最好是白色的 受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。 孵 育 孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃ 相对湿度：50%-60% 必须保证具有充分的新鲜空气流通，特别是在孵化5-6天以后 每天翻卵一次。 检卵（照蛋） 未受精卵：只见模糊的卵黄卵影，不见血管和鸡胚痕迹 活 胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡胚还可见到胚动。 死 胚：血管昏暗模糊，没有胚动。 接种前处理 用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室和胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。 对鸡胚进行消毒。 1、绒毛尿囊膜接种 2、尿囊腔接种3、卵黄囊接种4、眼球接种5、羊膜腔接种 正粘病毒和副粘病毒6、脑内接种 狂犬病毒7、静脉接种 蓝舌病毒 接种途径 主要用于正粘V和副粘V如流感V、新城疫V的分离和增殖。1、选用10-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位2、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒3、用钢锥穿一小孔4、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入0.2ml接种物5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并检卵一次，24h内死亡者废弃。6、24－72小时内死亡或存活的鸡胚用于收毒 尿囊腔接种 收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱1小时以上，冻死胚胎，防止收毒时出血。 收 毒 二、实验设计A 实验材料： 酶标板、 鸡抗AIV- NP蛋白抗体、兔抗AIV抗体、酶标记羊抗兔IgG（ IgG-HRP ）、AIV、健康鸡组织浸出液、被检材料、PBS缓冲液、封闭液、包被液、洗涤液、底物液、终止液。 设计检测禽流感病毒（AIV）的ELISA检测方法及实验步骤 三、实验设计B 实验材料： 新城疫病毒的阳性抗体 禽流感病毒的阳性抗体、 1%鸡红细胞 血凝板 根据所给材料设计诊断禽流感病毒与新城疫病毒的实验方法并利用该方法对疑似病例进行实验室诊断。 作 业 完成实验设计A 完成实验设计B，并利用该方法对疑似病例进行检测分析。