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- 2020-03-09 发布于上海
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大鼠血管平滑肌细胞的培养本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库,其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成,以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的,可以访问探生网biomean进行咨询,期待您的加入细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法将组织剪成小块后接种于培养瓶特点:简便易行、成功率较高。细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法结合生化和化学手段把已经剪切成较小体积的组织进行进一步分离,制成细胞悬液。主要有:胰蛋白酶法胶原酶法EDTA 法细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法从供体取得器官或器官组织块后,不进行组织分离而直接在一定环境中培养,保持其原有器官细胞的结构和联系并生存。体外培养细胞的分型贴附型: 细胞贴附在支持物上生长悬浮型:不贴附于支持物,呈悬浮生长准备细胞培养实验室培养用品细胞培养液、培养基“无菌”细胞培养实验室无菌操作区(无菌操作室、 超净台)孵育区制备区储藏区清洗和消毒灭菌区培养试剂的配制Hank’s液 (单位g)CaCl2 0.14KCl 0.4KH2PO4 0.06MgSO4.7H2O 0.10NaCl 8.0NaHCO3 0.35Na2HPO4.12H2O 0.12D-glucose 1.0Phenol red 0.01将 CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中,其它成分溶在750 mL的ddH2O中,混匀(用磁力搅拌器搅拌至溶解),定容至1000mL。高压蒸气消毒10分钟,4℃冰箱保存。D-Hank’s液 (单位:g)KCl 0.40KH2PO4 0.06NaCl 8.0NaHCO3 0.35Na2HPO4.12H2O 0.08Phenol red 0.02将以上成分溶于900mL ddH2O中,充分混匀,加ddH2O至1000 mL。高压蒸气消毒10分钟,4℃冰箱保存。青霉素、链霉素液配制青霉素80万U加Hank’s液至80 mL,终浓度1万u/ mL链霉素100万U(相当于1g)加Hank’s液至100 mL,终浓度10mg/mL分装后至-20℃冰箱保存。DMEM培养液900 mL ddH2O于1000 mL容器中,将DMEM粉1包倒入容器中,盛粉袋用50 mL ddH2O分次冲洗,也倒入容器,磁力搅拌溶解。加NaHCO3调PH至7.2加青、链霉素至终浓度100u/mL 和100ug/mL 0.22umX50滤膜过滤(负压泵抽吸),4℃冰箱保存。 小牛、胎牛血清灭活55℃水浴箱30分钟,置4℃冰箱保存灭活前放于-20℃冰箱保存待用临用前加入DMEM液中 平滑肌细胞原代培养方法 动物:大鼠150~180g,2~3只操作步骤大鼠颈椎脱臼致死固定消毒胸腹部大组织镊、组织剪切开胸腹部皮肤另一组织镊、组织剪切开胸腹部,并切除部分胸壁以利暴露眼科镊和眼科弯剪分离胸腹主动脉并放入盛有Hank’s液的细胞培养皿中,转入无菌室。或先用生理盐水漂洗,再放Hank’s液中,转入无菌室 眼科直镊和弯镊去除血凝块和血管外膜层。放入另一盛有Hank’s液的细胞培养皿中,剪去血管外的小分支放入含20%胎牛血清的DMEM中,眼科直剪剪开血管腔,以眼科弯镊轻轻擦拭内膜层,以去除内皮细胞放入另一含20%胎牛血清的DMEM中,用眼科弯剪剪碎血管组织至1mm 用吸管把组织块转入玻璃培养皿中,均匀贴壁,组织块的间距为0.5cm盖好瓶盖,轻轻翻转培养瓶,让瓶底朝上,并向瓶内注入适量培养液,于37oC孵箱内放置4~5小时,使得组织块干涸,并与瓶底贴附将培养瓶慢慢翻转平放,使组织块完全浸入培养液中,继续静置3~5天,切勿移动。待有细胞从组织块周围游离出后换液平滑肌细胞传代传代时间:大部分组织块长出细胞晕,并与相邻细胞晕相接触时就可以传代传代步骤:倒掉培养瓶中的培养液用D-Hank’s液洗两遍加2-3滴0.25%胰蛋白酶消化液,平放培养瓶
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