植物多倍体诱发和鉴定.pptVIP

实验11 植物多倍体的诱发和鉴定 实验目的： 2 鉴定诱导后染色体数目的变化。 1 了解人工诱导植物多倍体的原理、方法及其在植物育种上的意义； 实验原理： 各种生物染色体的数目、形态和结构都是恒定的。绝大多数的生物是二倍体，在植物界多倍体普遍存在，已知被子植物中有1/3或更多的物种是多倍体。除了自然界存在的多倍体物种以外，可以采用高温、低温、射线照射、等物理化学方法人工诱发多倍体植物。其中，以应用化学试剂更为有效和方便，如秋水仙素、异生长素、富民农等，使用最广泛、效果最好的是秋水仙素。 实验用品： 用具：显微镜、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、酒精灯、铅笔、吸水纸等。 药品：蒸馏水、卡诺氏固定液、45%醋酸、秋水仙素、改良苯酚品红染液等。 实验材料： 洋葱、大蒜等。本实验选用大蒜。 实验步骤： 1 培养根尖：将大蒜瓣放在盛有清水的培养皿中，让根部接触水，在20~25℃光照下培养，待根尖长到0.5~1cm时备用。 3 固定：11：30左右将剪取根尖1~2cm冲洗后转移至卡诺氏固定液中，室温下处理3~8小时。 4 解离：将冲洗后的根尖放入1mol/L的盐酸中，室温下处理10~15min。 2 多倍体诱导：将水换成0.1%的秋水仙素溶液，在阴暗处培养2天左右。 5 染色：切取1~2mm的分生区，用改良苯酚品红染液染色10~20min。 6 压片：盖上盖玻片，在酒精灯上烤片。然后固定盖玻片，用铅笔垂直、用力敲击盖片几下，将材料压成一层细胞。 8 镜检：先在低倍镜下找到细胞，再换成高倍镜仔细观察。 请注意比较该实验结果与有丝分裂实验结果有何不同？ 实验报告： 1 说明秋水仙素诱发多倍体的原理是什么？ 2 画出在显微镜下看到的多倍体细胞的图像； 3 了解诱发多倍体在育种方面的意义。 实验9 植物原生质体的分离与纯化 实验目的： 2 了解原生质体在细胞工程中的应用。 1 学习植物原生质体的分离和纯化技术； 实验原理： 原生质体是指去除了细胞壁的植物细胞。原生质体是植物体细胞遗传学研究的一重要实验系统，无论在理论方面还是在实践方面都有重要的研究价值。去除细胞壁一般通过酶解的方法，植物细胞壁是由纤维素、半纤维素、果胶质和少量的蛋白质和脂类组成的。由于这些不同物质的化学键，必须使用混合酶液以降解细胞壁。通常混合使用纤维素酶和果胶酶分离原生质体。 实验用品： 用具：显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、尼龙过滤网、离心管、剪刀、镊子、吸水纸等。 药品：70%乙醇、甘露醇、CPW缓冲液、纤维素酶、果胶酶、20%蔗糖溶液等。 实验材料： 菠菜、油菜等。 实验步骤： 1 选取叶片：选取充分伸展的幼嫩叶片，自来水清洗后，用吸水纸吸干水分。 3 酶解：在培养皿中放入混合酶液，将去掉下表皮的叶片剪成小块，去下表皮面向下铺于酶液中，充分接触酶液。25~30℃，酶解2~3小时。 4 过滤：酶解后的混合物用双层漏斗进行过滤，只允许单细胞和原生质体通过。 2 撕下表皮：用钟表镊子将叶子的下表皮撕掉，注意不要损伤叶肉细胞。 5 纯化：用比原生质体比重大的20%蔗糖溶液，离心后原生质体漂浮在溶液的表面。 过滤后的混合液，500rpm,3min离心 吸出上清液，沉淀用2ml8%甘露醇盐溶液悬浮 在新的离心管中加入约8ml20%蔗糖盐溶液，将上面的原生质体悬浮液用滴管轻轻地加载蔗糖溶液上 1000rpm，3min离心后，原生质体漂浮在蔗糖溶液 上，吸取原生质体于一新的离心管中 加入8ml8%甘露醇盐溶液，500rpm，3min离心后，弃上清，用甘露醇盐溶液悬浮沉淀。