液相色谱解析.pptxVIP

§3.1 概述 §3.2 仪器结构及分离原理 §3.3 高效液相色谱分类及原理 §3.4 色谱分离条件的选择与优化 §3.5 高效液相色谱方法的建立和应用; 流动相是液体的色谱法称为液相色谱法。液相色谱可分为平板色谱和柱色谱，在液相柱色谱中，采用颗粒十分细的高效固定相，并采用高压泵输送流动相，全部工作通过仪器来完成,这种色谱法称为高效液相色谱法. 1、高效液相色谱（HPLC）和气相色谱GC的比较 ; §3.2 仪器结构;2.主要部件;(2) 进样装置;(3) 高效分离柱;(4) 液相色谱检测器; a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 1、灵敏度高； 2、线形范围高； 3、流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 4、对流动相的流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱； 5、波长可选，易于操作； ;b. 光电二极管阵列检测器;光电二极管阵列检测器;c. 示差折光检测器;d. 荧光检测器;e.电化学检测器特点：1. 灵敏度高，可测至10-15 mol·L-1； 2. 选择性好，只响应电活性物质；  3.线性范围宽，可达4?5个数量级。 HPLC-ECD法是目前多组分复杂样品分析中的一个重要手段,尤其在分析低浓度生物样品中具有不可替代的优势，逐渐受到生命科学和分析科学工作者的关注;f.质谱仪;(5)附属部件 脱气装置，自动进样装置，梯度洗脱装置，柱温箱，衍生系统，馏分收集装置以及数据处理等装置如使用得当，会大大提高仪器的功能和提高工作效率; 高效液相色谱法的类型按组分在两相间分离机理的不同主要分为：液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法及分子排阻色谱法。 其中：以反相的化学键合相色谱应用最为广泛; 液固吸附色谱法; 液液分配色谱法;;化学键合相具有以下特点： 1）固定相不易流失，柱的稳定性和寿命较高。 2）能耐受各种溶剂，可用于梯度洗脱。 3）表面较为均一，没有液坑，传质快，柱效高。 4）能键合不同基团以改变其选择性，例如键合氰基、氨基等极???基团用于正相色谱法，链合离子交换基团用于离子色谱法，键合C2， C4， C6， C8， C16， C18， C22烷基和苯基等非极性基团用于反相色谱法等。因此，它是HPLC较为理想的固定相。 ; 离子交换色谱法;分子排阻色谱法;§3.4 色谱分离条件的选择与优化; 1. 流动相的基本要求 （1）与色谱柱不发生不可逆化学变化，即保留柱效或柱子的保留性质长期不变； （2）能溶解被分离的样品； （3）与所用的检测器匹配； （4）黏度尽可能小，以获得高的柱效； （5）价格便宜、毒性小、易于纯化； ; 2. 流动相选择的基本原则 原则： 与固定相极性越接近的流动相，其洗脱能力越强。 例：采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小);3. 流动相处理; 洗脱方式：等度洗脱和梯度洗脱 等度洗脱：流动相组成不随分析时间变化，始终是均一的流动相洗脱，适合于较简单样品分析 梯度洗脱：洗脱方式可以是线性的或非线性的，也可以是二元的或多元的，采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间;§3.5 色谱的应用 ;标准号;标准号;1） HPLC-DAD方法的建立 ;1） HPLC-DAD方法的建立 ;;色谱洗脱条件:美国Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 μm）色谱柱；流动相：甲醇 － 水，梯度洗脱，其时间程序为0→10→13 min，甲醇体积分数相应为72%→87%→72%，流速：1.0 mL·min-1;★检测条件的选择 ;色谱条件： 色谱柱：Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 μm） 流动相：甲醇- 0.4%磷酸 洗脱条件：梯度洗脱，