液相法测定兽药残留含量电子教材.docVIP

电子教材 《仪器分析》电子教材 液相法测定兽药残留含量 方法提要和原理 用磷酸盐缓冲溶液提取试料中的药物，C18柱净化，流动相洗脱。以磷酸一乙腈为流动相，用高效液相色谱—荧光检测法测定，外标法定量。 试剂和设备 试剂 以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂：水为符合 GB/T 6682规定的二级水。 达氟沙星，含达氟沙星不得少于99.0% 恩诺沙星，含恩诺沙星不得少于99.0% 环丙沙星：含环丙沙星不得少于99.0% 沙拉沙星：含沙拉沙星不得少于99.0% 磷酸 氢氧化钠乙暗：色谱纯 甲醇 三乙胺 磷酸二氢钟 5.0 mol/L氢氧化钠溶液，取氢氧化钠饱和液28 mL，加水稀释至100 mL 0.03 mo1/L氢氧化钠溶液：取5.0 mo1/L氢氧化钠液0.6 mL，加水稀释至100 mL 0. 05 mol/I_憐酸/三乙胺溶液：取液磷酸3. 4mL，用水稀释至1 000mL，用三乙胺调 pHI至2.4 磷酸盐缓冲溶液(用于肌肉、脂肪组织)：取磷酸二氢钾6. 8 g，加水使、群解并稀释至500 rnL，用5. 0 mol/L氢氧化钠溶液调节 pH至7.0 磷酸盐溶液(用于肝脏、肾脏组织)：取磅酸二氢钾6.8 g，加水溶解并稀释至500mL，pH为4. 0~5.0。 达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准储各液：分别取达氣沙星对照品约10 mg，恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星对照品各约50 mg，精密称定，用 0.03 mo1/L氢氧化的溶液溶解并稀释成液度为 0.2 mg/mL(达氟沙星)和1 mg/mL(恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星)的标准储备液。 置2℃~8℃冰箱中保存，有效期为3个月 。 达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液：准确量取適量标准储备液用乙腈稀释成适宜液度的达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液 。 置2℃~8℃冰箱中保存，有效期为1周。 仪器和设备 高效液相色谱仪(配荧光检测器) 天平：感量 0.01 g 分析天平：感量0.0001g 振荡器 组织匀装机 离心机 匀浆杯：30 mL 离心管：50mL 固相苹取柱：Varian BondEluto C8柱(100 mg/mL)。 微孔滤膜(0.45 μm) 试料的制备与预处理 制备 试料的制备包括： 一取绞碎后的供试样品，作为供试试料： 一取绞碎后的空白样品，作为空白试料： 一取绞碎后的空白样品，添加适宜液度的对照溶液，作为空白添加试料。 提取 取(2士0.05)g试料，管30 mL匀浆杯中，加磷酸盐缓冲溶液10. 0 mL，10 000 r/min匀浆1 min。 匀浆液转入离心管中，中速振荡5 min，离心(肌肉、脂肪10 000 r/min5 min，肝、肾脏15 000 r/min10 min) ， 取上清液，待用。 用磷酸盐缓冲溶液10.0 mL洗刀头及匀浆杯，转入离心管，洗残渣，混匀，中速振荡5 min，离心(肌肉、脂肪10 000 r/min5 min：肝、肾15 000 r/min10 min)。 合并两次上清液，混匀，备用。 净化 国相萃取柱先依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2 mL预洗。取上清液5.0 mL过柱，用水1 mL淋洗，挤干， 用流动相1.0 mL洗脱，挤干，收集洗脱液。 经滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱法测定 。 样品测定 色谱条件 色賠柱： C18 250 mm×4.6 mm(i.d)，粒径5 μm，或相当者 流动相： 0.05 mo1/L磷酸溶液/三乙胺一乙腈(82十18 ，v/v) ，使用前经微孔滤膜过滤 ： 流速： 0.8 mL/min 检测波长：激发波长280 nm，发射波长450 nm： 柱温：室温 进样量：20μL 测定法 取试样溶液和相应的对照溶液，作単点或多点校准，按外标法以峰面积计算，对照溶液及试样溶液中：达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星响应值均应在仪器检测的线性范国之内， 在上述色谱条件下，对照溶液和试样溶液的高效液相色谱图。 空白试验：除不加试料外，采用完全相同的测定步環进行平行操作。 数据处理与计算 按式( 1 )计算试料中达氟沙星、思诺沙星、环丙沙星或沙拉沙星的残留量： 式中： X一试料中达氟沙星、思。诸沙星、环丙沙星或沙拉沙星的残留量，単位为纳克每克(ng/g) ； A一试样、幣液中相应药物的峰面积： As一对照溶液中相应药物的峰面积： Cs一对照溶液中相应药物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ， V1 一提取用磷酸盐缓冲液的总体积，单位为毫升(mL) ， V2 一过 C8固相萃取柱所用备用液体积，单位为毫升(mL) ， V3 一洗脱用流动相体积，单位为毫升(mL)