郜刚分子生物学03染色体2包装与半保留复制.pptVIP

特殊的DNA复制方式 用蛋白质做引物的复制 腺病毒腺病毒DNA的复制是以前末端蛋白（pTP）为引物进行的单向复制。 腺病毒的DNA复制首先是以5′端结合有pTP的dCMP作为引物，以3′端的末端反向重复序列（ITR）为模板，进行链置换（strand displacement）合成，置换出的单链分子可以自我退火环化，形成锅柄样环形分子，然后这种环形分子再以相同的机制合成出子代双链DNA分子。 DNA聚合酶（polymerace, Pol）与pTP共同作用于末端复制原点，形成起始前复合物（preinitiation complex）。pTP和Pol均是病毒早期基因表达蛋白，由E2转录单位编码。在病毒DNA多聚酶的作用下，沿5到3方向连续地合成病毒DNA。这一过程还需E2编码的单链DNA结合蛋白（DNA binding protein, DBP）及细胞拓扑异构酶参与。其中DBP结合于被置换下来的另一条亲本链上，而拓扑异构酶可辅助复制叉的延伸。由于线形的腺病毒基因组末端反向重复序列的末端均有一个复制原点，因此两条亲本链可通过这种置换机制进行复制。腺病毒DNA复制时仅以一条亲本链为模板，复制完成后产生一条dsDNA子代链及一条被置换出的亲本单链。亲本单链通过末端重复序列互补产生柄环样复制中间体，以双链柄端为模板合成另一条子代DNA分子。 腺病毒DNA的复制起始，不需RNA引物,避免了5’-end shortent 另外一种复制的表述方式 根据DNA合成的起始方式，复制可以分为两种类型， 一类是从新起始，即先导链是从新开始的，这种类型主要是复制叉式复制，占大多数 另一类是共价延伸，即先导链是共价结合在一条亲本链上，这种类型主要是滚环式复制。 区别于教材 2.4 与DNA复制有关的物质9类 1、底物：四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP) 2、模板：以DNA的两条链为模板链，合成子代DNA DNA复制实际上就是DNA指导的DNA合成代谢。因此，必须有DNA作为复制的模板。体外复制实验证明，新合成DNA的特异性完全取决于事先加入的模板DNA，三磷酸核苷酸(dATP,dGTP，dCTP，dTTP)是合成原料。有模板和合成原料后，细胞内还有许多酶和蛋白质参与DNA的复制。 与DNA复制有关的物质9类 3、引物：DNA的合成需要一段RNA链作为引物 4、引物合成酶（引发酶）：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 与DNA复制有关的物质9类 1、底物：四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP) 2、模板：以DNA的两条链为模板链，合成子代DNA 3、引物：DNA的合成需要一段RNA链作为引物 4、引物合成酶（引发酶）：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 5、 DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶 ●以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物 ●反应需要有模板的指导 ●反应需要有3?-OH存在 ●DNA链的合成方向为5 ? ? 3 ? 原核生DNA聚合酶的性质 性质 DNA聚合酶I DNA聚合酶II DNA聚合酶III 5’-3’聚合活性 ++ + ++++ 5’-3’外切 + - - 3’-5’外切 + + + 新生链合成 - - + 复制的功能体现 针对DNA损伤修复时的复制，切除RNA引物并填补其留下的空 修复紫外等引起的DNA，即损伤修复 原核生物DNA复制的主要聚合酶 真核生DNA聚合酶的性质 p49 性质 α β γ δ ε 细胞定位 核 核 线粒体 核 核 5’-3’聚合 ++ ++++ + 5’-3’外切 - - - - - 3’-5’外切 - - + + + 复制的功能体现 负责起始两条新链的合成，引物是由引发酶合成的 负责损伤修复 线粒体中DNA的复制 先导链的延伸（主要的复制功能） 可能负责后随链的延伸； 复制修复 与教材有一定的区别 DNA聚合酶详解(补充兼复习) 5’ 5’ 3’ 3’ Klenow片段 RNA引物 3’模板链 大肠杆菌DNA聚合酶I (DNApolymeraseⅠ，DNApolⅠ) 大肠杆菌DNA聚合酶1的理化性质 纯化的DNApolⅠ由一条多肽链组成，约含1000个氨基酸残基，MW为109KD。 分子含有一个二硫键和一个-SH基。通过二个酶分子上的-SH基与Hg2+结合产生二聚体，仍有活性。 每个酶分子中含有一个Zn2+，在DNA聚合反应起着很重要的作用。 每个大肠杆菌细胞中含有约400个分子，每个分子每分钟在37℃下能催化667个核苷酸掺入正在生长的DNA链。 Klenow片段