华勃氏呼吸计法测定l-谷氨酸-biolabdlilied.pptVIP

* * 华勃氏呼吸计法测定L-谷氨酸 实验目的 了解华勃氏呼吸仪测定气体变化的原理。 掌握华勃氏呼吸仪测定气体变化的具体操作。 实验原理 华勃氏呼吸计法基本原理是在一密闭的、定温定体积的系统中进行样品气体变化的测定。当气体被吸收时，反应瓶中气体分子减少，压力降低；反之，产生气体时，压力则上升，此压力的变化可在测压计上表现出来，由此可利用气体定律计算出产生的CO2或吸收O2的量。此法可用于细胞、线粒体等耗氧速率和发酵作用的测定，也可进行研究其他有关和O2和CO2气体交换反应，如呼吸作用、光合作用、脱羧酶和氧化酶的活性等。 大肠杆菌菌体内含有L-谷氨酸脱羧酶，能专一地催化L-谷氨酸脱羧，释放出二氧化碳。利用华勃氏呼吸仪测定并计算出二氧化碳量后，可进一步求出L-谷氨酸含量。 仪器、原料和试剂 仪器：移液管2ml、0.5ml、0.2ml、0.1ml；2ml注射器；瓦氏呼吸仪1套。 原料： （1）大肠杆菌-丙酮粉的制备：将纯化的大肠杆菌由试管斜面培养接种到10支200ml茄形瓶培养基上，于37℃培养16～18h。 （2）培养基的配方如下： 蛋白：10g 牛肉膏浓缩液：5g 琼脂：20g 蒸馏水：1000ml 每一