离心技术与细胞器分离.pptxVIP

离心技术与细胞器的分离;一 实验目的;二 实验原理 ;离心力（centrifugal force，Fc）;相对离心力（relative centrifugal force，RCF） ;; ;离心机的结构 ;离心机的转头主要有：角度转头（angle-headed rotors）、甩平式水平转头（swing-out rotors）/吊桶式转头（swinging bucket rotors）;离心技术类型 ;差速离心法 （differential velocity centrifugation） ;Figure 8-9 Molecular Biology of the Cell (? Garland Science 2008);差速离心法 （differential velocity centrifugation） ;密度梯度离心;Density gradient centrifugation ;;实验步骤;6．滤膜过滤（300目）, 去掉未裂解的原生质体及裂解的细胞膜内溶物等大块杂质，收集过滤液。 以上步骤所提到的细胞核不纯,其中混杂有原生质体、线粒体、叶绿体, 下面采用蔗糖密度梯度离心分离细胞核和叶绿体。 7. 把含有2.3M蔗糖的CSK buffer 3ml加至于离心管底部. 8. 再把3ml 60%percoll CSK buffer 轻轻的平铺于7的溶液上方, 用移液枪加时一定要小心顺着管壁把一溶液平铺于另一溶液之上. 这时应该能观察到溶液明显的分层现象. 9. 然后把6中过滤溶液轻轻的平铺于8的溶液上方。观察分层现象。 10. 3200g离心32分钟，溶液梯度层重新分布。 11.分别吸取一些各层的溶液进行改良品红苯酚染色、镜检。观察不同大小不同密度的细胞器的分布情况以及他们的形态特征。 ;试剂;实验结果记录;