Seahorse海马代谢仪使用说明.pptVIP

How do I know whether the cell density is good? ? Basal OCR range: 20-160 pmol/min ? Maximum recommended OCR: 400 pmol/min ? ECAR: 5-100 mpH/min 优势特点： 采用超敏感的生物传感器和非接触式设计，真正实现检测细胞零损伤； 实时检测细胞有氧呼吸、糖酵解的能量代谢情况，即时反应细胞生理状态； 同步检测细胞的耗氧量和产酸率（pH值变化），数据结果更加全面； 实现同步检测96/24个细胞样品，通量高，速度快； 自动化检测流程、自动化控制添加多达四种药物，操作方便高效。 Thank you 此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！ * * * 在加oligo之前显示的数值，代表的是细胞的基础耗氧量，包括线粒体氧化磷酸化及质子漏耗氧。即质子在线粒体膜通过呼吸链形成电势能后，一部分质子回流可以通过ATP合酶形成ATP，将势能转化为ATP中的能量。一部分通过线粒体膜只是发生氧化，势能转化为热量，但是没有用于合成ATP。oligo是ATP合酶抑制剂，加入此药后减少的耗氧代表的是机体用于ATP合成的耗氧量，间接显示此时细胞的ATP产量。FCCP是一种解偶联剂，作为一种质子载体使得大量质子回流，大量耗氧，但是这种质子回流不能形成ATP，FCCP后耗氧的增加，代表线粒体的最大耗氧能力，间接显示最大的呼吸能力，而其相对与基础值的高值代表其还具有的呼吸潜力。最后加入是抗霉素A或鱼藤酮，二者是呼吸链抑制剂，完全阻止线粒体耗氧。 * * 基础值代表的是细胞的非糖酵解产酸值，加入葡糖糖后代表的是此时细胞的糖酵解能力，而加入oligo后，氧化磷酸化被抑制，此时细胞完全靠糖酵解供氧，此时产酸增加，增加值代表细胞的还具有的糖酵解能力即潜力，总的数值代表细胞的最大糖酵解能力，最后加的是糖酵解抑制剂，此药之后的数值表明完全是由糖酵解之外的机理产酸所致的。 * Seahorse 汇报人： 学号： 背景 生物能量学（Bioenergetic） 探讨的是生物将氧份转为能量并借此推动生命的过程。不同的细胞依据其生理特性及健康状况，能量供需系统亦有所不同。 简介 美国海马生物科学利用细胞外流量（Extracellular Flux，XF）检测专利技术，发明了业界第一款海马细胞能量代谢实时测定仪/生物能量代谢测定仪（Seahorse XF Extracellular Flux Analyzers），是进行细胞代谢分析、氧呼吸测定、药物代谢分析、线粒体有氧代谢和糖酵解等功能的最佳分析工具。 特点：通过特殊的细胞培养微孔板设计，在测量时临时形成的约2ul微环境中，利用无创的专利光学传感器同步地实时探测溶解氧（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）变化，从而快速了解细胞内两大能量转换途径（线粒体的有氧代谢和糖酵解）的能量代谢状态。 仪器外观 Hydro Booster Sensor Cartridge Cartridge Lid 耗材 自动药物注射端口 启用实时功能分析 Cell Mito Stress Test Assay Kits 水化探针 1.在Utility Plate每孔中加入1ml校准液 (Seahorse XF 校准液用于溶解和校准 XF 小柱，并包含 FluxPak) 实验前一天 2.将Hydro Booster放在Utility Plate上，Sensor Cartridge放在最上面 3.放入无CO2的培养箱，37℃过夜（使校准液能浸没在sensors中；保证培养箱湿度，防止干燥） 培养细胞 1.100ul培养液收集细胞，按最佳细胞密度重悬细胞（10,000 - 80,000个细胞/孔）。 2.每孔接种100 μL细胞悬液，背景校正孔（A1, B4, C3, D6）不接种细胞。将细胞板室温静置在超净台上1 h。 3.将细胞板放置在细胞培养箱中让细胞贴壁（快1h；慢5-6h），在显微镜下观察细胞是否贴壁。 4.细胞贴壁后，每孔加入150 μL生长培养液，总体积为250 μL。加液时，沿壁轻轻加入，避免吹起刚贴壁的细胞。 5.将细胞放置在细胞培养箱中过夜培养。在显微镜下观察细胞的生长状态。 ? 预热仪器 打开Seahorse仪器和电脑，并打开软件，使仪器升温至37 ℃，过夜预热。 准备XF检测液 一个培养板 手动加液需100ml，仪器加液需200ml 1.使用NaOH调节pH值至7.35±0.05 2.检测液中所需要添加的底物及浓度取决于细胞类型和实验设计，或者与生长培养基保持一致。 3.3