重组产物表达纯化与.pptxVIP

本章内容;DNA重组技术用于表达蛋白产物;表达外源基因的总的要求;表达载体最能体现外源基因表达技巧;第5页/共77页;1、大肠杆菌表达系统;启动子强度、载体性质、翻译起始区RNA的二级结构、密码子偏爱性、mRNA稳定性和表达产物的稳定性(N末端规则)等； 启动子：选择强启动子； 核糖体结合位点：SD序列与16S rRNA 3‘末端互补程度；AUG 与SD 序列间的距离； mRNA二级结构及其稳定性。;大肠杆菌表达系统的启动子;常用的细菌启动子;常用的细菌启动子及特性;取自大肠杆菌Lac操纵子，受阻遏蛋白Lac I负调控； 特点：受IPTG的诱导，在诱导表达时不能用葡萄糖作碳源物质（CAP的作用）； 缺点：驱动表达能力不高，且在无诱导时也存在少量表达； 后一问题可以通过对阻遏蛋白的编码基因进行改造得到改善（如lac Iq突变体lac I表达被提高，因而增强了无诱导时对启动子的抑制）；;第12页/共77页;B Tac启动子(The tac Promoter,PTac);;第15页/共77页;C Theλ PL Promoter：PL;大肠杆菌表达载体pBV221的图谱;D T7表达系统;Novagen公司的pET的特点;第20页/共77页;;pET其他特征;枯草杆菌的优点;第24页/共77页;问题与方向;酵母：操作方便，有转录及翻译后加工能力； 昆虫细胞：具有高等真核生物表达