质粒不稳定性.pptxVIP

质粒载体的不稳定性分析 ;质粒载体不稳定的现象;质粒载体不稳定性的类型;结构不稳定性;分离的不稳定性;质粒拷贝分配到子细胞的途径可分为主动分配和随机分配两种不同的方式。 主动分配的方式有两种: 平均分配--每个子细胞刚好获得一半数目的质粒拷贝 配对位点分配—只有一对质粒呈主动分配，其他的随机分配。 由于主动分配存在着有效的质粒拷贝数控制系统，从而保证了质粒的高度稳定。;;随机分配;影响质粒载体稳定性的主要因素;新陈代谢符合对质粒载体稳定性的效应;拷贝数差异对质粒载体稳定性的影响;具低差度分布特性的质粒载体相当的稳定，具有高差度分布特性的质粒载体稳定性较差。位于后者的这种分布的低拷贝数的一段产生无质粒载体细胞的频率相当高。;寄主重组体系对质粒载体稳定性的效应;影响质粒重组的突变同样也会影响质粒的稳定性。实验观察表明，在重组缺陷(rec-)的大肠杆菌寄主细胞中，基因工程常用载体pBR322和pUC当以单体形式存在时最稳定。随着质粒寡聚体比例的逐渐上升，其稳定性就相应的下降。;一般情况下,质粒的结构不稳定性可以通过宿主菌株的谨慎和恰当的选用来消除。因此在质粒 不稳定性的 研究过程中, 人们关注最多的,通常是质粒的分离不稳定性。 ;产腈水合酶重组大肠杆菌的质粒稳定性研究;质粒pETNHM的结构稳定性;;在LB培养基中对重组E.coli BL21(DE3)/pETNHM每隔6h进行反复的