第十章分子生物学技术4-6.pptVIP

YAC的主要缺点1．存在高比例的嵌合体，即一个YAC克隆含有两个本来不相连的独立片段；2．部分克隆子不稳定，在转代培养中可能会发生缺失或重排；3．难与酵母染色体区分开，因为YAC与酵母染色体具有相似的结构。4．操作时容易发生染色体机械切割。 以细 菌寄主系统为基础的克隆载体形成嵌合体的频率较低，转化效率高，又易于分离。科学家用染色体建造法用F质粒及其调控基因构建细菌载体，克隆大片段DNA。该质粒主要包括oriS， repE（控制F质粒复制）和parA、 parB（控制拷贝数）等成分。 BAC的优点1． 易于用电击法转化E.coli（转化效率比转化酵母高10-100倍）；2． 超螺旋环状载体，易于操作；3． F质粒本身所带的基因控制了质粒的复制；4． 很少发生体内重排。? 有人把人类染色体端粒DNA上单个α-卫星DNA单元多聚化形成1Mb左右的大片段并与人类基因组DNA混合，产生了能被复制、能正常分裂并得到长期稳定保存的人工合成的染色体，长度约为6-10Mb，称为MAC或HAC。 细胞破碎 离心 电泳（SDS、双向电泳、脉冲电泳等）分离及纯化 蛋白质的分离纯化 蛋白质鉴定 蛋白质保存 蛋白质鉴定：分子大小——电泳比对、质谱分析 结构鉴定——X射线、MNR