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第15讲 基因工程和细胞工程
★ [最新考纲]
1.基因工程的诞生(Ⅰ);2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(Ⅱ);3.基因工程的应用(Ⅱ);4.蛋白质工程(Ⅰ);5.植物的组织培养(Ⅱ);6.动物细胞培养与体细胞克隆(Ⅱ);7.细胞融合与单克隆抗体(Ⅱ);8.DNA的粗提取与鉴定。
精读教材——记一记
1.与目的基因相关的两类“检测”
(1)标记基因:检测受体细胞中是否含“重组DNA”或运载体。——在依据标记基因(如四环素抗性基因)制备的特定选择培养基(如加入了四环素的培养基)中能够生存下来的受体细胞才可能含重组DNA(目的基因+运载体)或运载体。
(2)DNA分子杂交技术(基因探针)检测转基因生物中是否含目的基因、在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素作标记,制作探针,以此与已提取到的转基因生物基因组DNA杂交,若显示出杂交带,则表明目的基因已插入到受体细胞基因组中。(P14正文)
2.基因工程的常考点
(1)目的基因插入位置:启动子与终止子之间。
(2)将目的基因导入受体细胞不发生碱基互补配对。
(3)常用的受体细胞
①植物:受精卵、体细胞。
②动物:受精卵。
③微生物:大肠杆菌、酵母菌等。
(4)原核生物作为受体细胞的优点:多为单细胞、繁殖快、遗传物质相对较少。
3.动物细胞培养关键点
(1)培养基的特有成分:动物血清。
(2)培养过程:原代培养、传代培养。
(3)两次使用胰蛋白酶:第一次用于制备细胞悬液,开始原代培养,第二次用于处理瓶(壁)上的细胞。
4.关注植物细胞工程的几个问题
(1)植物细胞A和植物细胞B杂交获得的杂种细胞有三种类型:AA型、BB型、AB型,符合要求的只有AB型,需要进行筛选。
(2)杂种细胞形成的标志:新的细胞壁的生成。
(3)杂种植株遗传物质的变化:杂种植株的变异类型属于染色体变异,其染色体数通常是两亲本细胞染色体数目之和,杂种植株属于异源多倍体。
(4)植物组织培养时植物激素和光照的使用
①植物激素的使用:脱分化阶段先使用生长素,后使用细胞分裂素,以促进细胞的分裂;再分化阶段生长素比例较高,以促进根的形成。
②光照的使用:脱分化阶段不需要给予光照,再分化阶段需要给予光照,以利于叶绿素的形成。
(5)利用植物组织培养生产细胞产物时,有时只需将外植体培养到愈伤组织,从愈伤组织中获取产物。
5.关注制备单克隆抗体的两个常考点
(1)三种细胞的特点
①B淋巴细胞:能分泌抗体,不能大量增殖。
②骨髓瘤细胞:能大量增殖,不能分泌抗体。
③杂交瘤细胞:既能分泌抗体,又能大量增殖。
(2)两次筛选目的不同
①第1次:获得能分泌抗体的杂种细胞。
②第2次:获得能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞。
自我诊断——判一判
(1)携带链霉素抗性基因受体菌的筛选必须通过分子检测。(×)
(2)转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定必须通过分子检测。(×)
(3)一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列。(√)
(4)用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸。(×)
(5)每个重组质粒至少含有一个限制性核酸内切酶识别位点。(√)
(6)自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上,属于基因工程。(×)
(7)重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子中脱氧核糖和磷酸交替连接。(×)
(8)应用DNA探针技术,可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达。(×)
(9)动物的生长激素基因转入植物后不能表达。(×)
(10)培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是组织培养。(√)
(11)去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理。(√)
(12)产生抗人白细胞介素—8抗体的杂交瘤细胞的筛选必须通过分子检测。(√)
(13)21三体综合征的诊断必须通过分子检测。(×)
(14)乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养。(×)
(15)培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞。(×)
(16)动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体体现了细胞的全能性。(×)
(17)细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行。(×)
答案:(1)× (2)× (3)√ (4)× (5)√ (6)× (7)× (8)× (9)× (10)√ (11)√ (12)√ (13)× (14)× (15)× (16)× (17)×
高频命题点1 基因工程
真题领航——目标方向导入高考
1.(2019·全国Ⅰ卷,38)基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。回答下列问题。
(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以从基因文库中获得。基因文库包括________和________。
(2)生物体细胞内的DNA复制开始时,解开DNA双链的酶是________。在体外利用PCR技术扩
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