核酸杂交技术分子生物学.pptxVIP

核酸杂交技术Nucleic Acid Hybridization 核酸杂交概念及原理 核酸探针 核酸杂交的分类Southern blot Northern blotchipChIP on chip主 要 内 容一、核酸分子杂交的概念及原理核酸杂交:两个不同来源的、含有互补碱基序列的单股核酸分子，通过碱基配对形成一个新的、稳定的双股分子的过程。 核酸分子杂交技术原理 核酸经加热变性后，在低于变性温度20℃-30℃时，反应系统中加入的核酸探针与待测核酸样品中具有互补序列的单链DNA或RNA形成双链结构，通过检测标记信号即可检测特定的核酸片段。 二、核酸探针 核酸探针（nucleic probe）:带有可检测标记，能与特定序列的核酸片段互补配对形成双链的一段核酸。 核酸探针的质量（标记效率和特异性）是核酸分子杂交成功的关键。1. 核酸探针的分类根据标记物的性质分： 放射性标记:32P,35S,125I, 3H。敏感度高，半衰期短（32P 14.3天，35S 87.1天，125I 60天，3H 的半衰期长达12.3年，但它所释放β放射线能量太低，只能用于组织原位杂交），有辐射危害。 非放射性标记：化学发光标记、酶标记、荧光标记等根据探针中核酸的性质分：DNA (包括cDNA) 探针RNA探针(包括cRNA) 寡核苷酸探针肽核酸（peptide nucleic acid, PNA）探针(1