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细胞工程知识点 1、细胞工程：以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有 目的地利用或改造生物遗传性状， 以获得特定的细胞、 组织产品或新型物种的一 门综合性科学技术。 2、细胞工程的应用： 1) 动植物快速繁殖技术：植物组织培养、人工种子、试管动物、克隆动物 2) 新品种的培育：细胞融合、细胞水平的重组 3) 细胞工程生物制品：单克隆抗体制备、疫苗生产 4) 细胞疗法与组织修复： 2 细胞工程理论基础 1、细胞全能性：每个活的体细胞都具有像胚性细胞那样，经过诱导能分化发育 成为一个新个体的潜在能力，并且具有母体的全部的遗传信息。 2、细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。 3、细胞的脱分化： 在一定营养和刺激因素作用下 ,具有特定结构与功能的植物组 织的细胞被诱导而改变原来的发育途径 ,逐步失去原来的分化状态 ,细胞特性消失 , 转变为具有分生机能的细胞 ,并进行活跃的细胞分裂 ,这一过程称为去分化。 3 细胞工程技术 1、实验室条件：组成：准备室、无菌间、操作间、培养室、分析室。 2、无菌技术、显微技术、细胞观察与分析、细胞分离、细胞保存与复苏 （1）细胞保存方法 传代培养保存法 低温冷冻保存法 (低温、超低温保存 ) 液体固化的方式（形成冰晶、形成无定型的玻璃化状态） 玻璃化指液体转变为非晶态（玻璃态）的固定化过程，在此状态时，水分子没 有发生重排， 不产生结构和体积的变化， 因此不会由于机械或溶液效应造成组织 和细胞伤害，化冻后的细胞仍有活力。 冷冻方法（缓慢冷冻法、快速冷冻法 预冷冻法包括逐级冷冻和两部冷冻） 细胞复苏 按一定复温速度将细胞悬液由冻存状态恢复到常温的过程。 复苏细胞 一般采用快速融化法。 以保证细胞外结晶快速融化， 以避免慢速融化水 分渗入 细胞 内，再次形成胞内结晶损伤 细胞。 细胞培养和代谢调控： 1、细胞培养：模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其 生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研 究。 2、细胞培养的操作方式：分批式培养、流加式培养、半连续式培养、连续式培 养、灌流式培养。 3、分批式培养 （植物细胞培养）：分批式培养过程的环境随时间变化很大， 可分 为延滞期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期等五个阶段。 4 、流加式培养 (适合植物）：随着营养物质的不断消 耗，不断地向系统中补充新 的营养成分，使细胞进一步生长代谢，直到整个培养结束后取出产物。 5、半连续式培养（动物细胞） ：定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连 同细胞、载体一起取出。 6、连续式培养： 该模式是将细胞接种 于一定体积的培养基后， 为了防止衰退期 的出现，在细胞达最大密度之前， 以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基； 同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出， 以保持培养体积的恒 定。理论上讲，该过程可无限延续下去。 7、灌流式培养：灌流式培养是把细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长 和产 8、物形成过程中，不断地将部分条件培养基取出，同时又连续不断地灌注新的 培养基。 （动物细胞） 9、代谢工程：通过某些特定生化反应的修饰来定向的改善细胞的特性，或是利 用重组 DNA 技术创造新的化合物。它是利用基因工程或是分子生物学技术、将 生物技术内的代谢路径改变， 通常改变生体内化学反应的酶。 代谢工程技术目前 以微生物利用为主， 改变工业微生物的代谢路径， 生产所需要的化学物质， 如抗 生素。 10、逆代谢工程： 是一种采用逆向思维方式进行代谢设计的新型代谢工程。 就是 先在