苯酚硫酸法测定多糖.docxVIP

-2-3 -1-1 -2 -3 -1 -1 -1 -1 苯酚—硫酸法测定党参总糖 1．材料与方法 1．1 材料与试剂，仪器 1.1.1 材料、试剂 党参（肉党、普通纹党、产于中寨的纹党）；95％乙醇；苯酚； 浓硫酸均为分析纯。 1.1.2 仪器与设备 FA-2400分析天平，101A型电热鼓风干燥箱，Mb型可调式电热板， 电热恒温水浴锅，SK5200H超声清洗器，UV-9100紫外-可见分光光度 计 1.2 方法 1.2.2 供试品溶液的制备 取党参粉末2g，置圆底烧瓶中，加95％乙醇3次（20.20.20ml） 每次2h,过滤，蒸干乙醇，残渣用水溶解，在电热板上加热，提取3 次（50.50.50ml）,每次2h，过滤，滤液置于50ml容量瓶中，加蒸馏 水至刻度摇匀。 1.2.3 标准溶液的配制 精密称取105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖10mg置于100 mL容量 瓶中，加水溶解并稀释至刻度摇匀，得0.1mg／mL的储备溶液，备用。 1.2.3 5％苯酚溶液的制备 精确量取6.3ml 80％的苯酚溶液转移至100ml容量瓶中，加 蒸馏水至刻度，摇匀后置于棕色试剂瓶中，备用。(实验室苯酚为师 姐配好的80％的溶液，避光密封保存于冰箱中，用时水浴加热使其 成为透亮的溶液) 1.2.4 标准曲线的制备 精确吸取葡萄糖标准液0、1、2、3、4、5、6 mL，分别置于10 mL容量瓶中，以蒸馏水补至 10 mL摇匀，依次吸取2ml加入试管中， 加入苯酚液1.0 mL和浓硫酸5.0 mL，混匀，在室温放置30 min后， 于波长490 nm处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标，葡萄糖浓度 为横坐标绘制标准曲线。 (10*10 mg.ml*1/10=10*10 mg.ml =10?g/ml.20.30.40.50.60) 1.2.5 样品的测定 准确吸取供试品溶液0.1 mL加水定容至10mL，精确吸取此稀释 液2mL于试管中，按标准曲线制备的方法测定吸光度值，并根据回归 方程，求得其浓度，计算样品中总糖的含量。（党参溶液的浓度 =2/50*0.1/10=1/2500g.ml =1/2.5 mg.ml =400?g.ml ） 吸光度2y = 0.062x - 0.0542R 吸光度 2 y = 0.062x - 0.0542 R = 0.9826 系列 1 2 2 结果与分析 2.1 标准曲线 标准曲线回归方程建立用紫外分光光度计，在4 9 0 n m 的波 长处测定吸光度，以试剂空白参比实验。结果见表1 标液体积 (ml) 标液多糖含 量(?g) 吸光度  0 2 4 6 8 0 4 8 12 16 0 0.171 0.379 0.666 0.992 Y=0.062X-0.0542，r =0.9826，以吸光度为纵坐标葡萄糖浓度为横 坐标绘制标准曲线见图 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 线性 (系列 1) -0.2 0 5 10 15 20 糖含量（?g） 2.2 样品中多糖含量测定结果 按上述多糖含量测定方法测的样品的吸光度，并按标准曲线测 得的多糖含量占药材总量如下表。 肉党1 肉党2 纹党1 纹党2 中寨纹党1 中寨纹党2 吸光度 0.362 0.487 0.622 0.579 0.874 0.624 占药材含量百分比 （％） 0.84 1.09 1.36 1.25 1.37 1.35 上图所得的标准曲线，线性不好，按此曲线药材中所得糖含量 也不高，并且当标准溶液液为 10ml 时，测不出吸光度，所以改变标 液浓度浓度，取葡萄糖标准液 0、1、2、3、4、5、6 mL 按上述方法 重做，所得的吸光如 标液体积 (ml)  0 1 2 3 4 5 6 吸光度2y = 0.135x - 吸光度 2 y = 0.135x - 0.0185 R = 0.9937 系列 1 2 标液多糖 含量(?g) 吸光度  0 2 4 6 8 10 12 0 0.198 0.567 0.802 1.002 1.391 1.579 Y=0.135X-0.0185，r =0.9937，以吸光度为纵坐标葡萄糖浓度为横 坐标绘制标准曲线见图 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 线性 (系列 1) -0.2 0 5 10 15 糖含量（?g） 样品中多糖含量测定结果 按上述多糖含量测定方法测的样品的吸光度，并按标准曲线测 得的多糖含量占药材总量如下表。 肉党1 肉党2 纹党1 纹党2 中寨纹党1 中寨纹党2 吸光度 0.783 0.680 0.942 0.809 0.874 1.047 占药材含量百分比 （％） 7.42 6.5 8.9