论述实验6-酵母RNA的分离及组分鉴定.pptVIP

最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 实验6酵母RNA的分离及鉴定 最新课件 * 一、实验目的 掌握核酸分离纯化的方法 掌握用苔黑酚法鉴定RNA组份的原理和方法 最新课件 * 二、实验原理 酵母核酸中 RNA 含量较多。在细胞中除了核酸外还有 Pr、多糖及其他多种化合物； RNA可溶于碱性溶液，在碱性提取液中加入酸性乙醇溶液可以使 RNA 析出； RNA是由核糖、嘌呤/嘧啶碱和磷酸组成的——在提取的 RNA 中加1.5mol/L硫酸煮沸5min即可得到这些组份的混合溶液 —— 可对它们分别进行定性鉴定，以证明提取物是否为核酸。 最新课件 * RNA的来源和种类很多，提取制备方法各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。苯酚法是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后，RNA以白色絮状沉淀析出。该法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法是用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3―4h，迅速冷却，提取液经离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。 稀碱法使用用0.2%NaOH溶液使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液,用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。提取的RNA有不同程度的降解。 最新课件 * 1、器材： 干酵母粉，天平，抽滤瓶、布氏漏斗、离心机 2、试剂： ① 0.04 mol/L氢氧化钠 ②酸性乙醇 ③无水乙醚（C?P） ④氨水（C?P） ⑤ 1.5mol/L硫酸 ⑥ 5%硝酸银 ⑦苔黑酚―三氯化铁试剂 ⑧定磷试剂 三、实验器材与试剂 最新课件 * 四、实验操 作 取酵母粉7.5g 于100ml锥形瓶中 沉淀 上清液 上清液 沉淀 95%乙醇洗涤2次(每次5 ml) 乙醚洗涤1次(10 ml) 乙醚转移沉淀至布氏漏斗中抽滤 沉淀在空气中自然干燥 RNA粗制品 取200mg，加1.5mol/L硫酸溶液10mL 沸水浴加热5 min，得到水解液. 组分鉴定 加入0.04 mol/L NaOH 溶液 45 ml 摇匀 沸水浴加热30min（时常搅拌），冷却 离心（3000r/min）15 min 倾入25ml酸性（乙酸）乙醇溶液中（边搅拌边缓缓倾入）Ph5-6，静置，核糖核酸完全沉淀 离心（3000r/min） 3 min 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件 最新课件