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种子生活力的测定 一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法 【原理】 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF），胚便染成红色。当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。TTC还原反应如下： TTC（无色） TTF（红色） 【仪器与用具】 培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。 【试剂】 TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。 【方法】 1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。 2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。 3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。 4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min. 5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。 表32-1 染色法测定种子生活力记载表 方法 种子名称 供试粒数 有生活力种子粒数 无生活力 种子粒数 有生活力种子 占供式粒数的% 【注意事项】 1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 2.染色温度一般以25～35℃为宜。 3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。 4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。 5.不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。现将主要作物种子生活力测定所需条件列入表32-2。 表32-2 TTC法测定主要作物种子生活力要点 作 物 种子准备 TTC浓度(%) 在35℃下 染色时间(h) 水 稻 去壳纵切 0.1 2～3 高粱、玉米及麦类作物 纵切 0.1 0.5～1 棉花、荞麦、蓖麻 剥去种皮 1.0 2～3 花生 甜菜 大麻 向日葵 剥去种皮 0.1 3～4 大豆 菜豆 亚麻 二叶草 无须准备 1.0 3～4 二、红墨水（酸性大红Ｇ）染色法 【原理】 有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质能力，某些染料如红墨水中的酸性大红Ｇ不能进入细胞内，胚部不染色。而丧失活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内使胚部染色，所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。 【仪器与用具】 与TTC法相同。 【试剂】 红墨水溶液的配制：取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）作为染色剂。 【方法】 1.先将待测种子用水浸泡3～4h，待充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸3～5min，作为死种子。 2.取浸好的新种子、陈种子和死种子各50粒，如为小麦和玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵切成两半，其中一半用于测定。 3.将备好的种子分别放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。 4.染色10～20min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子， 直到所染颜色不再洗出为止。 5.对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。凡胚部不着色或略带浅红色者，即具有生活力的种子，若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子，把测定结果记入表32-1（同TTC法）。