不同叶龄枫香叶中总黄酮含量差异比较.docxVIP

不同叶龄枫香叶中总黄酮含量差异比较 摘要：为测定不同叶龄枫香（Liquidambar formosana Hance）叶总黄酮的含量，取不同叶龄的枫香叶，用80%乙醇以料液比1∶10超声提取，以芦丁为参照物，采用三氯化铝比色法，在波长421 nm处用分光光度法测定其吸光度，依标准曲线计算幼嫩叶、成熟叶和落叶不同叶龄的叶片总黄酮含量。结果表明，幼嫩叶、成熟叶和落叶的总黄酮含量分别为2.66%、3.27%、0.31%。高效液相色谱测定结果显示，不同叶龄的枫香叶片黄酮类成分基本相同，但含量存在差异，其中落叶中黄酮含量最低。对嫩叶和成熟叶而言，成熟叶总峰面积要高于嫩叶峰面积约40%。因此，枫香叶中总黄酮含量与叶龄有关，成熟叶含量最高，嫩叶次之，落叶含量最低。在同等条件下，枫香叶处于成熟期时黄酮含量相对较高。在不考虑其他因素影响的情况下，成熟枫香叶是提取枫香天然黄酮的最佳资源。　　关键词：枫香（Liquidambar formosana Hance）；叶片；不同叶龄；总黄酮；含量　　　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.16.033　　枫香树（Liquidambar formosana Hance）属金缕梅科（Hamamelidaceae），主要分布在中国秦岭以及淮河以南各地，广西壮族自治区百色市、梧州市等地有丰富的枫香树资源。枫香叶具有祛风除湿、行气止痛的功效，内服可用于治疗肠炎、痢疾、胃痛，外用可治疗毒蜂螫伤、皮肤湿疹等。在广西的民间盛大节日，枫香叶还用作五色糯米饭的原料。枫香叶中化学成分复杂，含有黄酮类、有机酸、蛋白质、多糖、单宁等大分子化合物[1，2]，其中黄酮类是重要的活性成分之一，也是五色饭中重要的色素之一。研究表明，枫香叶中黄酮类色素具有多种药理活性，是一种良好的氧自由基清除剂和免疫调节剂，在心血管疾病、糖尿病、肿瘤的防治等方面具有较好的作用[3-5]。有文献报道，枫香叶中除叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素和花色素苷等不同色素与叶色有关外[6]，枫香叶在不同生长期的黄酮含量也呈动态变化[7]，推测黄酮含量的动态变化与枫香叶色的多变有关联。然而查阅文献所知，未见有不同叶龄（幼嫩叶、成熟叶和落叶）枫香叶黄酮含量变化的研究报道。为此，课题组通过测定不同叶龄枫香叶的黄酮含量，揭示不同叶龄的枫香叶所含黄酮的差异性，以期为枫香叶作为天然食品色素原料开发提供参考。　　1 材料与方法　　1.1 材料　　1.1.1 试剂 甲醇、三氟乙酸（TFA）为色谱纯，冰醋酸、醋酸钠、无水三氯化铝、无水乙醇、石油醚为分析纯，均购自上海国药集团化学试剂有限公司；芦丁标准品由中国药品生物制品检定所生产（批号：100080-200707）；色谱用水为娃哈哈纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司生产。　　1.1.2 仪器 BP211D分析天平（德国赛多利斯公司）；WD-9415E超声波清洗器（北京市六一仪器厂）；722S可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；PHSJ-4A pH计（上海雷磁仪器厂）；戴安U3000高效液相色谱仪，带ODS-A C18色谱柱，4.6 mm250 mm，5 mu;m（戴安中国有限公司）。　　1.1.3 样品的采集 枫香叶于2015年3月底采自广西河池市罗城县郊区。在同棵枫树上剪取长约30 cm的带有幼嫩叶和成熟叶片的枝条若干，取上部3片刚展开的叶片定为幼嫩叶，取中下部3片成熟的叶片定为成熟叶[8]，同时在同株枫树下捡取清洁无腐败的新鲜落叶（以下称落叶），都于室温条件下自然阴干，备用。　　1.2 方法　　1.2.1 标准品溶液的配制 精确称取芦丁标准品5.72 mg，用甲醇充分溶解后，移至10 mL容量瓶中，定容，配成0.572 mg/mL溶液；取0.572 mg/mL溶液4 mL，用甲醇定容至10 mL，配成0.228 8 mg/mL的芦丁溶液，作为标准溶液。　　1.2.2 样品提取 枫香叶总黄酮提取方法参照文献[9]的方法并略有改动，将干燥的枫香叶幼嫩叶、成熟叶、落叶分别用粉碎机粉碎，分别称取1.001 6、1.000 8、1.002 6 g于锥形瓶中，加入石油醚（料液比为1∶20）超声提取15 min，减压抽滤，每份样品反复提取3次，除去叶绿素，再将滤渣加入体积分数为80%的乙醇溶液（料液比为1∶10）超声提取60 min，趁热减压抽滤，反复提取3次，用少许80%乙醇洗涤滤渣后合并滤液，旋干后，所得固体用甲醇充分溶解，移至10 mL容量瓶中，甲醇定容，作为枫香叶样品待测液。　　1.2.3 标准曲线的建立 精确称取0.022 88 g芦丁，用甲醇溶解后转移至100 mL容量瓶中，定容，配成0.228 8 mg/mL芦丁标准溶液。依次吸取该浓度标准溶液0.2、0.4、0.6、