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细菌内毒素检查法 文件编号：QC3 048 页 码： PAGE 3/ NUMPAGES 6 质量控制文件—检验方法 版 本 号：V01 禁止复印 PAGE 5 This SOP is strictly confidential. Any use and copy unauthorized by SL Pharma is forbidden. 仅限北京世桥生物制药有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。 受控号： 细菌内毒素检查法 颁发部门： 质量保证部 生效日期： 年 月 日 分发清单: 质量控制部 责任人 起草人 审核人 审核人 批准人 部 门 质量控制部 质量控制部 质量保证部 质量负责人 姓 名 签 名 日 期 1 目的 为确保药品检验的准确有效，建立细菌内毒素检查法的标准操作规程。 2 范围 适用于细菌内毒素的检查。 3 定义与缩写 3.1细菌内毒素检查法：本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。 3.2细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品：除另有规定外，应使用由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品。 3.3细菌内毒素检查用水：系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。 4 职责 4.1 质量控制部QC人员： 负责执行本规程。 4.2 QC主管： 负责监督本规程的实施。 5 内容 5.1设备用具 5.1.1实验设备：电热干燥箱（250℃以上）、内毒素凝胶法测定仪（37±1℃ 5.1.2实验用具：刻度吸管、吸耳球、试管、试管架、封口胶、砂轮、75%酒精棉球、金属直镊、秒表、记号笔、取样瓶、可调微量移液器及配套玻璃吸头。 5.2试剂：鲎试剂（其标示值用λ表示）、内毒素工作标准品、内毒素检查用水。 5.3试验准备 5.3.1洗液的配制：称取重铬酸钾200g，用少许热水溶解后，加浓硫酸至5000ml。 5.3.2 玻璃器皿的洗涤：将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并空干水分后置洗液中泡至少4小时取出将洗液滤干，用自来水将残余的洗液洗净，再用新鲜蒸馏水冲后置适宜的密闭金属容器，迅速置烤箱中。 5.3.3除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素：玻璃器皿置烤箱后经250℃干烤30分钟以上 5.4 鲎试剂灵敏度复核试验 5.4.1在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，用EU／ml表示。当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。 5.4.2根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制成2.0λ，1.0λ， 0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。取分装0.1mL复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做n管；另外 2管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将试管中溶液轻轻混匀后封闭管口，垂直放入37℃±1℃的恒温器中，保温60分钟 5.4.3将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性，未形成凝胶或者形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程应避免受到振动，造成假阴性结果。 5.4.4当最大浓度2.0λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值 （λC）。 λC =antilg (∑X/n) 式中 X为反应终点内毒素浓度的对数值(lg)。反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。 当λC在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批鲎试剂的灵敏度。每批新的鲎试剂在用于试验前都要进行灵敏度的复核。 5.5 供试品干扰试验 5.5.1按鲎试剂灵敏度复核试验项下每浓度平行管各2管，用细菌内毒素检查用水和未检出内毒素的供试品溶液或其不超过最大有效稀释倍数（MVD）的稀释液分别将同一支细菌内毒素工作标准品制成含细菌内毒素工作标准品2.0λ，1.0λ，0.5λ和0.25λ四种浓度的内毒素溶液。用细菌内毒素检查用水和用供试品溶液或其稀释液制成的每一浓度平行做4支，另取细菌内毒素检查用水和供试品溶液或其稀释液各做2支阴性对照管。如最大浓度管2.0λ均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管均为阴性时，按下式计算用细菌内毒素检查用水制成的内毒素标准溶