第三章 培养基灭菌.pptVIP

第三章 培养基灭菌 重点：消毒与灭菌的区别；灭菌方法；加热灭菌的原理；影响培养基灭菌的其他因素；培养基灭菌时间计算；分批灭菌和连续灭菌比较； 难点：培养基灭菌时间计算； 一、消毒与灭菌的区别： 所谓灭菌就是杀死一切微生物，包括微生物的营养体和芽孢。 消毒是指消灭一切致病微生物（病原体）。 二、消毒与灭菌在发酵工业中的应用 牛奶巴氏消毒法：80-95℃，10min 发酵培养基的灭菌:121℃,20min 三、灭菌方法： 1、干热灭菌：灼烧灭菌；加热方式有电热、红外线加热等；相对与湿热灭菌，干热要求时间长，温度高（一般160℃，2hr） 1）火焰焚烧法：接种环、试管口等 2）干烤法：利用热空气灭菌 用法：160℃,2小时 特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死。所以温度高、时间长。 2、湿热灭菌：蒸气释放热量，使微生物蛋白质变性。 特点：温度低、时间短、灭菌效果好 原因： 1) 菌体内含水量越高，则凝固温度越低； 2) 蒸汽冷凝会放出潜热； 3) 饱和水蒸汽穿透力强； 4) 湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定 性，主要破坏氢键结构。 湿热灭菌优点： 1）蒸气来源易，低价无毒； 2）蒸气穿透力强灭菌彻底； 3）蒸气冷凝释放热量； 4）蒸气易输送，易调节，易管理。 湿热灭菌缺点： 1）设备费用高； 2）不能用于怕受潮的物料； 3、射线灭菌法： 1）电离辐射：χ、γ、β射线 。 原理 ：引起水和其他物质的电离，产生游离基，破坏DNA，从而造成细胞损伤。 特点；穿透力强，无专一性，对所有生物均有杀伤作用。 适用：菌种诱变。 2）非电离辐射（紫外线） 方法：在波长265-266nm处，杀菌力最强。 原理： （1）作用于DNA ，使同链DNA相邻嘧啶间形成嘧啶二聚体，引起DNA结构变形，阻碍正常的碱基配对，从而造成菌的变异或死亡。（光复活酶可修复） （2）有氧时产生过氧化氢，强氧化杀菌。 适用：空气、水的消毒杀菌（紫外灯）。 特点：穿透力差。 3.过滤灭菌法 采用介质过滤的方法阻截微生物达到除菌的目的 主要用于空气灭菌 4、化学药品灭菌 方法：浸泡、熏蒸、喷洒、擦拭等，常用化学药品： 1）表面消毒剂： （1）酚类： 石炭酸（苯酚），0.1%抑菌；1%杀菌 甲酚皂（甲酚+肥皂）：3-5%皮肤消毒 机理：作为表面活性剂，使膜损伤；蛋白质变性 P.C.（石炭酸系数）：为消毒剂杀菌效率的标准。 是在一定时间内（10min）被测试的药剂能杀死全部供试微生物的最高稀释度与达到同样效果的酚最高稀释度的比值。 （2）醇类： 乙醇：70-75%杀菌效率最高 机理：具脱水作用，能穿透菌体进入蛋白质分子肽链间隙，使蛋白质变性或脱水沉淀，造成微生物死亡。 无水乙醇：表面蛋白凝固，保护膜，杀菌力差 甲醇可使眼睛失明，故不宜做消毒剂；其他醇因不溶于水，一般不用。 （3）醛类： 甲醛： 机理：蛋白质烷化剂； 应用：福尔马林（40%）； 10%的甲醛熏蒸，用于空气灭菌。 （4）表面活性剂： 可降低表面张力效应的物质。 机理：使菌体细胞膜破损；使菌体蛋白质变性。 种类：洗必泰、新洁尔灭等 特点：快速、彻底、效率高 （5）氧化剂类： 机理：破坏蛋白质的巯基，强氧化剂可破坏蛋白质的氨基与酚羟基 碘酒 7g I：5g KI，溶于100ml 95%乙醇。 1%碘酒10min可杀死芽孢杆菌和部分真菌， 并使流感病毒灭活。 漂白粉（氯化钙与次氯酸钙的混合物） （6）重金属及其化合物： 所有重金属盐Cu、As、Ag、Hg等对微生物均有毒性。 机理： 1）可与酶蛋白的-SH基结合，使酶失活； 2）易与带阴电荷的菌体蛋白吸附，使之变性沉淀。 应用：波尔多液、红汞、硝酸银等。 特点：简便。但使用应谨慎，防止在体内积累。 （7） pH的杀菌作用 酸: 蛋白质变性 无机酸:杀菌力与H+浓度成正比。 有机酸:与不电离的部分成正比,故有时有机酸的灭菌效果无机酸，分子杀菌力大于离子。 碱: 强碱造成蛋白质、核酸大分子变 性、水解，使菌死亡。 2）抗代谢药物 机理：与正常代谢产物同时存在，并产生竞争性拮抗作用（与相应酶竞争性结合）。只有当正常代谢产物的量少或不存在时，抗代谢物才有用。 种类：磺胺——抑制叶酸合成 6 - 巯基嘌呤——抑制嘌呤合成 5 - 甲基色氨酸——抑制氨基酸合成 机理：磺胺——对氨基苯甲酸的类似物，竞争性地与二氢叶酸合成酶结合，抑制叶酸合成 3）?抗生素 （1）抗生素：生物产生的