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本方法适用于酿造酱油时在制品菌种孢子发芽率的测定。 1 仪器及试剂 a. 凹玻片、盖玻片、显微镜; b. 恒温箱; c. 生理盐水、无菌水、察氏培养基; d. 接种环、酒精灯等。 2 操作 2.1 制备悬浮液:取种曲少许入盛有25mL事先灭菌的生理盐水和玻璃珠的锥形瓶中,充分振摇约15min,务使孢子个个分散,制成孢子悬浮液。 2.2 制作标本:先在凹玻片的凹窝内滴入无菌水1滴,再将察氏培养基融化并冷却至45～ 50℃后,接入孢子悬浮液数滴。充分摇匀后,用玻璃棒以薄层涂布在盖玻片上,然后反盖于凹玻片的窝上,四周涂凡士林封固。放置于30～32℃恒温箱内培养3～5h。 2.3 镜检: 取出标本在高倍镜头下观察孢子发芽情况,逐个数出发芽孢子数和未发芽孢子数 3 计算 a 发芽率(%)＝━━×100 A 式中:a--发芽孢子数,个; A--发芽及不发芽孢子总数,个。 4 注意事项 4.1 为了正确起见,要同时制作两张以上标本片镜检,取其平均值。 4.2 悬浮液制备后要立刻制作标本培养,时间不宜放长。 4.3 培养基中接入悬浮液的数量,应根据视野内孢子数多少来决定,一般以每视野内有10 ～20个孢子为宜。 4.4 每次镜检,要在不同视野中连续观察100～200个孢子的发芽情况。 4.5 由于发芽快慢与温度有密切关系,所以培养温度要严格控制。为了加速发芽,可提高培养温度至35℃左右,但必须与30～32℃法进行对照。 4.6 菌种不同,驯化程度不同,测定用培养基配方允许稍有不同,例如3.951菌种可在察氏培养基中加几滴豆饼煮出液。 4.7 察氏培养基配方如下: 硝酸钠3g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖20g 蒸馏水 1000mL琼脂20g将上述药品按顺序溶解后,加入琼脂加热溶化。分装15×150mL试管中, 加压灭菌后备用。
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