醋酸纤维薄膜电泳 原理 步骤 详细.pptVIP

/ 上海交通大学医学院 醋酸纤维素薄膜电泳装置示意图 上海交通大学医学院 6.染色(Stain) 电泳完毕后断电，用镊子取出薄膜条投入染液5~10分钟，染色过程中不时轻轻晃动染色皿，使染色充分 7．漂洗(Wash) 从染液中取出薄膜条并尽量沥去染液，投入漂洗皿中反复漂洗，直至背景漂尽为止。此时清晰可见5条色带，待干 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 8.定量(Quantify) （1）洗脱比色：将各蛋白质区带仔细剪下，分置各试管中，另从空白背景剪块平均大小的膜条置于空白管中。各管加入0.4mol/l NaOH 4ml,于37℃水浴20分钟（不时振荡），待颜色脱净即用波长620nm比色，以空白管调零读取各管吸光度。 （2）计算 吸光度总和（T） =A+α1+α2+β+γ（吸光度） ? 上海交通大学医学院 ? 血清蛋白组分的相对百分数： A%=A/T×100% α1%=α1/T×100% α2%=α2/T×100% β%=β/T×100% γ%=γ/T×100% / 醋酸纤维薄膜电泳 Cellulose acetate membrane electrophoresis，CAME 上海交通大学医学院 讲课内容 醋酸纤维素 1 醋酸纤维薄膜的特点 2 影响电泳结果的因素 3 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 4 上海交通大学医学院 一、醋酸纤维素（Cellulose acetate ） ???? 是纤维素醋酸酯(acetate ester of cellulose )，由纤维素的羟基进行乙酰化后制得，将它溶于有机溶剂涂抹成均匀的薄膜，待有机溶剂挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜 厚度：0.15mm 上海交通大学医学院 Magnification of Cellulose Acetate filter 上海交通大学医学院 讲课内容 醋酸纤维素 1 醋酸纤维薄膜的特点 2 影响电泳结果的因素 3 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 4 上海交通大学医学院 二、醋酸纤维薄膜的特点 Characteristics of Cellulose Acetate Membrane 1.吸附作用小 2.电渗(electroosmosis)作用小 3. 需加样量少 4. 亲水性较小 上海交通大学医学院 血清蛋白质各组分的相对分子重量及等电点Molecular weight and isoelectric point of serum proteins serum protein MW pI Alb ?1 ?2 ? ? 66248 130000 200000 1300000 1500000 4.86 5.02 5.02 5.12 6.8～7.3 上海交通大学医学院 Amido black 10B 上海交通大学医学院 氨基黑10B染色洗脱法结果 蛋白组分 平均值 （%） 参考范围 （%） Alb ?1 ?2 ? ? 65.59 3.12 6.16 9.09 17.40 57.45～71.73 1.76～4.48 4.04～8.28 6.79～11.39 11.85～22.97 上海交通大学医学院 Ponceau S 上海交通大学医学院 丽春红S染色扫描法结果 蛋白组分 g/L 占蛋白百分数（%） Alb 35～52 57～68 ?1 1.0～4.0 1.0～5.7 ?2 4.0～8.0 4.9～11.2 ? 5.0～10.0 7.0～13 ? 6.0～13.0 9.8～18.2 上海交通大学医学院 Schematic representation of a protein electrophoresis 上海交通大学医学院 几种疾病的蛋白电泳变化Abnormal serum protein electrophoresis 病名 Alb ?1 ?2 ? ? 肾病 肝硬化 原发性肝癌 多发性骨髓瘤 慢性炎症 无丙种球蛋白症 双白蛋白血症 ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↑ ↓ AFP ? ↑ ↑ ↑ ↓ ? ? ↑ ↑ ?-?桥 ? ↑ ? ↓ ↑↑ ↑ ↑↑ ↑ ↓↓ 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 ?-?桥 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 双白蛋白血症 上海交通大学医学院 讲课内容 醋酸纤维素 1 醋酸纤维薄膜的特点 2 影响电泳结果的因素 3 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 4 上海交通大学医学院 三、