液相出峰异常解决方法.docVIP

高效液相出峰异常解决方法 一、保留时间变化可能的原因 : 解 决 方 法 1.柱温变化 : 柱恒温 2.等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 3.缓冲液容量不够 : 用25mmol/L的缓冲液 4.色谱柱污染 : 每天冲洗柱 5.柱内条件变化 : 稳定进样条件，调节流动相 6. 色谱柱快达到寿命 : 采用保护柱 二、保留时间缩短 可能的原因 : 解 决 方 法 1.流速增加 : 检查泵，重新设定流速 2.样品超载 : 降低样品量 3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5，检查柱的方向 4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀 5.温度增加 : 柱恒温 三、保留时间延长 可能的原因 : 解 决 方 法 1.流速下降 : 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡 2.硅胶柱上活性点变化 : 用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱钝化柱 3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀 5.温度降低 : 柱恒温 四、出现肩峰或分叉 可能的原因 : 解 决 方 法 1.样品体积过大 : 用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15% 2.样品溶剂过强 : 采用较弱的样品溶剂 3.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件 4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品 5.进样器损坏 : 更换进样器转子 五、鬼峰 可能的原因 : 解 决 方 法 1.进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 2.样品中未知物 : 处理样品 3.柱未平衡 : 重新平衡柱，用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱) 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配，用抗氧化剂 5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 六、基线噪声可能的原因 : 解 决 方 法 1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气，加柱后背压 2.污染(随机噪声) : 清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂 3.检测器灯连续噪声 : 更换氘灯 4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源，检查干扰的来源(如水浴等) 5.检测器中有气泡 : 流动相脱气，加柱后背压 七、峰拖尾 可能的原因 : 解 决 方 法 1.柱超载 : 降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相 2.峰干扰 : 清洁样品，调整流动相 3.硅羟基作用：加三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值，钝化样品 4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品 5.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件 6.死体积或柱外体积过大 : 连接点降至最低，对所有连接点作合适调整，尽可能采用细内径的连接管 7.柱效下降 : 用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱 八、峰展宽 可能的原因 : 解 决 方 法 1.进样体积过大 : 用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15% 2.在进样阀中造成峰扩展 : 进样前后排出气泡以降低扩散 3.数据系统采样速率太慢 : 设定速率应是每峰大于10点 4.检测器时间常数过大 : 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% 5.流动相粘度过高 : 增加柱温，采用低粘度流动相 6.检测池体积过大 : 用小体积池，卸下热交换器 7.保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱 8.色谱柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小 9.样品过载 : 进小浓度小体积样品