华东理工大学仪器分析高效液相色谱法.pptVIP

? 离子交换色谱与离子色谱的分离原理一样 ? 离子色谱最大的改进是解决了微量组分的检 测问题 双柱抑制型： 在分离柱和检测器之间加一个化学抑制 器，其作用有二，一是降低淋洗液的背景电导，二 是增加被测离子的电导值，改善信噪比。灵敏度高。 单柱非抑制型： 淋洗液直接进入电导检测器。简单、 分辨率较好。 （ 2 ）固定相 离子交换剂，最常用的是乳胶薄壳型离子交换 树脂小球，根据功能基可分为：强酸型（磺酸 基团）、强碱型（季铵基）、弱酸型（羧酸）、 弱碱型（伯、仲、叔胺） （ 3 ） 流动相 双柱抑制型： 分离阳离子，一般采用无机酸如 HCl ， HNO 3 等；分离阴离子，一般采用 NaOH 、 NaHCO 3 /NaCO 3 。 单柱非抑制型： 分离阳离子，用低浓度的 HCl ， HNO 3 等； 分离阴离子，可用苯甲酸及其盐、酒石酸、柠檬酸等 应用举例 波长的选择 （ 2 ）示差折光检测器 结构 响应特性 ? 通用性检测器 ? 低灵敏度 ? 基线易受温度的影响 ? 不适合梯度洗提 荧光检测器 结构 响应特性 ? 选择性检测器。如 PAH ，蛋白质 ? 高灵敏度，比紫外高约 1000 倍 ? 适合梯度洗提 应用举例 电导检测器 结构 响应特性 ? 选择性检测器，对离子型化合物有响应 ? 灵敏度高 ? 受温度的影响 ? 不能梯度洗提 讨论：液相色谱检测器的选择 1. 葡萄糖产品的含量测定 2. 地下水中酚类化合物的分析 3. 矿泉水中无机阴离子的测定 4. 痕量氨基酸的分析 5. 去痛片中有效成分的分析 6. 链烷基磺酸盐的测定 7. 蛋白质的分子量测定 （ 5 ）几种检测器特性比较 示差折光 紫外 荧光 电导 应用范围 通用 选择性 高选择 性 选择性 可否梯度淋洗 不可 可 可 不可 线性范围 10 4 10 5 10 3 10 4 最小检测量 μg ng pg ng 对温度敏感度 敏感 低 低 敏感 溶剂使用情况 无限制 受限制 受限制 受限制 四、 HPLC 主要类型及其选择 ? 化学键合相色谱法 ? 液固色谱法 ? 离子对色谱法 ? 离子色谱法 ? 体积排阻色谱法 1. 化学键合相色谱法 （ 1 ）分离机理 ? 正相键合相色谱法 ：固定相的极性 大于 流动相的极 性， 适用于分离油溶性或水溶性的极性或强极性化 合物。 分配机理：分配系数 x 为溶质， M 为溶剂 ? 反相键合相色谱法 ：固定相的极性 小于 流动相的极 性，适于分离非极性、极性和离子性化合物。 应用 最广泛 ] [ ] [ 2 2 M x x NH R SiO K p ? ? ? ? ? 反相键合相色谱法的 疏溶剂 机理 ： 溶质进入极性流动相后，排挤 部分溶质分子，其疏水基团由 于流动相的斥力推动而直接与 非极性固定相上的烷基缔合， 构成单分子吸附层，这种作用 时可逆的。当流动相极性减小 时，这种疏溶剂斥力下降。 （ 2 ）固定相 疏水基团 如不同链长的烷烃（ C 8 和 C 18 ）和苯基等 极性基团 如氨丙基，氰乙基、醚和醇等。 类型 分离方式 应用特点 C-18 反相、离子对 普适性好，保留值大。溶于水的高极性化合 物、中等极性化合物 C-8 反相、离子对 与 C-18 类似，保留值略小 C-3,C-4 反相 保留值小，适合肽类和蛋白质 苯基 反相 保留适中，选择性不同。非极性、中等极性 化合物 -CN 反相、正相 选择性与硅胶类似，保留小，用途广 -NH 2 反相、正相 分离糖类、核苷酸、固醇等 二醇基 正相 分离有机酸、排阻分蛋白质等 醚基 反相、正相 分离酚类、芳硝基化合物，保留比 C-18 强 聚苯乙烯基 反相 pH 使用范围广，对部分分离峰形好，寿命长 常用固定相 应用举例 （ 3 ）流动相 ? 表征溶剂特性的重要参数 ? 溶剂强度 ε ° ：溶剂分子与吸附剂的亲合程度， ε ° 越大，亲合力约大。 ? 溶解度参数 δ ：衡量溶剂极性强度的指标， δ 越大， 极性越强。是溶剂