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外标两点法对数方程是在应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)进行药物分析时的含量计算方法。大家都知道在用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)的定量用外标两点法对数方程,并且药典也要求如此!比如银杏叶、知母、黄芪、人参、署预、(中药含有皂苷的),化药也有一些。但对数方程的列法却各不相同,有很多人是3楼的列法:峰面积和进样量同时去对数。但就药典的文字理解:“对数方程”是指在方程里有一个对数,而同时取对数列出来的方程叫双对数方程。根据最小二乘法应该是进样量(ug)与峰面积的对数的线性方程。我们用蒸发光散射检测器时,由于散射光的信号为非线性的,根据ELSd的工作原理,进样质量和ELSD检测响应值(峰面积)一般不呈现良好的线性。因为信号相应值与物质质量的对数呈线性关系,如果对进样质量和峰面积分别取常用对数后,两者呈现良好的线性关系,但是它是一条不经过原点的直线,所以在含量测定时必须使用外标两点法,通常称作外标两点法对数方程,在中国药典2000版2002增补本以及2005版、2010版中,凡采用HPLC-ELSD方法进行含量测定时,均有“采用外标两点法对数方程计算含量”一句。进两个不同浓度的对照品, 将进样量和对应的峰面积取对数后,由两点确定方程,方法是将两组数值代入直线方程:y=Kx+b,即可求出式中的K和b。再将求出的K和b代入公式:InA=KInC+b ,即可求出对数方程。公式为:InA=KInC+bA:峰面积K:为公式y=Kx+b中的KC:进样量b:为公式y=Kx+b中的b计算时将样品峰面积(A)代入方程InA=KInC+b,计算出InC后,再取反对数就可以计算出C了.再电子表格计算较为方便. 在Excel中进行直线回归,可得出该方程,最后求出带入计算,就OK了!
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