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. 动物细胞生产药用蛋白工艺的研究进展 学院： 专业： 姓名： 学号： word 教育资料 . 动物细胞生产药用蛋白工艺的研究进展 【摘要】近年来，由于哺乳动物细胞具有对重组蛋白质进行正确折叠、装配和翻译后修饰的 优点，利用哺乳动物细胞生产医用蛋白质已成为生物制药产业的重要组成部分。应用哺乳动 物工程细胞系统生产药用蛋白显示了越来越重要的地位。本文对动物细胞培养技术和提高蛋 白质的产量进行了简述。 【关键词】 动物细胞；药用蛋白；生产工艺 近年来，动物细胞培养技术的快速发展极大地推动了现代生物医药产业的发 展。这一技术已广泛应用于蛋白质药物研发、疫苗制造、干细胞移植、人造组织 器官培养等各个领域，日益成为当今生命科学研究和生物医药开发的强力工具。 目前，国内外一些科研机构和高新技术企业正专注于这一领域的研究与开发，并 不断获得新的科研成果和技术产品。这些新成果和产品的推广应用正引导着细胞 ［1］ 培养工程技术走向当今生物医药领域的技术前沿 。 重组要用蛋白的翻译后修饰是充分发挥其药理活性、药代动力学行为以及体 内稳定性所必需的。这些翻译后修饰包括蛋白的正确折叠、二硫键的形成、多聚 化、蛋白酶加工、磷酸化以及充分糖基化，是在内质网和高尔基体内进行的。因 此，有必要用哺乳动物细胞表达形容生产治疗用重组活性蛋白，特别是对与结构 复杂、分子量巨大，或是二硫键数目多，或糖基化程度高的蛋白。有些天然结构 的药用蛋白只能用哺乳动物细胞培养生产。目前，投放市场以及临床中试中的重 组蛋白有 70%来自哺乳动物细胞培养。 随着哺乳动物细胞培养技术的发展和重组药 用蛋白的需求， 哺乳动物细胞培养生产的药用蛋白正在不断增加 [2] 。以下就目前动 物细胞大规模培养工艺以及提高药用蛋白质量的方法作一简述。 1. 目前公开发表工艺的研究 蛋白治疗药物有单克隆抗体治疗乳腺癌的 Herceptin ，免疫球蛋白肿瘤坏死因 子(TNF) 受体融合蛋白治疗类风湿性关节炎的 Enbrel 和灭活的甲肝疫苗 Vaqta 等。 动物细胞培养技术已经成为一个受到普遍信任的产业化生产技术，并逐步形成商 业化操作水平。 首先重组治疗药物，主要是重组蛋白或抗体，对产品应用最有代表性的需要 word 教育资料 . 是生产产量与质量， 其生产形式至少 70% 是采用搅拌式生物反应器悬浮培养形式， 50%以上采用无血清培养；疫苗和组织替代品其产品来源许多不用的细胞系，它需 要特殊的生物反应器系统和培养液；虽然用于诊断的产品主要是单克隆抗体，类 似于重组治疗，但需求量明显低，这就允许考虑多种特殊的生产形式和生物反应 器系统。因此，目前用哺乳动物细胞大规模培养生产蛋白的工业化过程，可以看 作是以搅拌式生物反应器悬浮培养作为通用技术平台，使用常用的三种细胞 (CHO、 SP2P0、NSO) 依托该平台工艺并使其生产能力提高。平台工艺的特点是采用无血 清培养和成熟的流加和灌流工艺。 1.1 悬浮细胞培养工艺 悬浮培养适于许多细胞培养，如杂交瘤、鼠骨髓瘤 ( SP2P0， NSO) ，对适于 贴壁培养的细胞 ( CHO，BHK) 可进行细胞生长形式的驯化。 在大规模细胞培养中， 细胞死亡是维持细胞高活性和高密度的最大障碍，由于在悬浮培养工艺中，细胞 的死亡主要是因凋亡所致。通过导入凋亡抑制基因 (Bcl-2) 来调节细胞抗凋亡的机 制，延长细胞生存时间，