流感的相关知识及实验室检测【创意版】.pptVIP

图. 中国流感病毒检出率及其亚型分布 流感的季节性流行 冬春季 夏季 冬春季 长江以南 长江以北 流感病毒在我国的活动规律南北存在明显的差异。 高峰期 1.流感患者 2.隐性感染者 1.近距离飞沫传播 2.接触传播 传染源 传播途径 病毒变异快 65岁以上老年人、 婴幼儿、 慢性病患者 反复感染 并发症 感染流感的一般临床表现： 流感一般急性起病，主要表现为发热(可达39-40℃)，伴畏寒、寒战、头痛、肌肉关节酸痛、极度乏力、食欲减退等全身症状，常有咽痛、咳嗽，可有鼻塞、流涕，也可有呕吐、腹泻等症状。 一般来讲，流感全身症状比普通感冒重。流感为自限性疾病，发病3-4天后体温逐渐消退，全身症状好转。重症病例可导致慢性基础病加重，也可出现病毒性肺炎、心脏和神经系统损伤等并发症。 流感病毒的实验室检测 2 流感病毒的实验室检测 采集标本类型： 常规　　　　　　　特殊 咽拭子　　 　 鼻咽/呼吸道吸取物 鼻拭子　　　　 鼻洗液、含漱液 血清 　　 　 呼吸道灌洗液　 实验前处理 流感标本采集 采集时间：病人发病的头3天内采集，最好是24h内 咽拭子采集 咽拭子 用灭菌棉签（最好用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入含3-4ml采集液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。 注意：采样前1h内不要进食和饮水，采样液中严禁加入抗生素 标本的处理和保存 标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存，常用的采样液有：PH 7.4-7.6的Hank’s液或MEM 标本应在4℃保存24小时内送至实验室，实验室对收到的标本最好24～48小时内进行检测或接种。 如不能在48h内检测或接种，标本应置于-70℃保存 实验室生物安全要求 01 季节性流感病毒分离鉴定在生物安全Ⅱ级实验室进行。 03 用灭活的抗原进行血清学检测时可以在生物安全Ⅰ级实验室进行 流感病毒分离鉴定及其它检测过程中所有能够产生感染性气溶胶的过程必须在生物安全Ⅱ级实验室的生物安全柜里操作。 02 03 常见的流感病毒实验室检测方法 检测方法 灵敏度 特异性 优点 缺点 分子诊断 （RT-PCR） 高 高 病毒含量低的标本检出率高，耗时短 培养法 （细胞培养法、鸡胚培养法） 低 高 在分子生物学问世前，一直是流感实验室诊断的金标准，至今仍不可取代 阳性检出率低，漏检率高，耗时长，技术要求高 快速试纸条法（金标法） 较低 较高 操作简单，耗时短，不需仪器设备，适用于快速筛查 存在假阴性，漏检率高，只能鉴定出流感病毒A、B型，不能进行亚型鉴定 血清学检测 （血凝抑制试验） 高 高 能够鉴定亚型 要求急性期和恢复期双份血清，对于季节性流感仅限于流行病学调查及回顾性诊断 季节性流感检测流程 临床标本采集 接种MDCK细胞 接种鸡胚 红细胞凝集抑制试验，鉴定病毒 红细胞凝集试验 流感病毒核酸检测阳性 PCR鉴定 流感病毒亚型的鉴定 3 红细胞凝集试验 1 红细胞凝集抑制试验 2 流感病毒亚型的鉴定 流感病毒亚型的鉴定流程 红细胞凝集试验 4个凝集单位配制“回滴” 红细胞凝集抑制试验 判定流感病毒型别 红细胞凝集试验（HA） MDCK细胞或鸡胚收获的标本分离物首先用鸡、豚鼠或人红细胞进行红细胞凝集试验（HA），确定病毒滴度 原理：流感病毒颗粒表面的血凝素蛋白（HA）含有能结合并识别红细胞表面含唾液酸的糖蛋白或脂蛋白结构，许多哺乳动物和禽的红细胞表面均含有这两种成分。因此流感病毒能与其结合并识别，产生凝集现象。当血清中有特异性抗体与病毒血凝素结合后，可以抑制凝集现象出现 A H B C D E F G 100ul病毒液 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 稀释完病毒液后加入50ul红细胞悬液 50ulPBS 稀释病毒 加入配制好的红细胞悬液 充分混匀，置室温孵育30-60分钟 观察记录结果 操作简图 病毒 原液 1:2 1:128 HA: 32 HA＞128 HA:4 红细胞凝集试验（HA）结果判读 HA滴度≥8，进行红细胞凝集抑制（HI）试验； 若传1～2代后，HA滴度仍8者，可应用核酸检测方法进行鉴定 HA滴度8者，继续在敏感的MDCK细胞系或鸡胚上进行传代培养，使其HA滴度≥8后，再进行HI测定 红细胞凝集抑制（HI）试验 HA试验完成后，用国家流感中心每年提供的抗A（H1N1）、抗A（H3N2）、抗B（Victoria系）和抗B（Yamagata系）4种标准参照血清，进行红细胞凝集抑制（HI）试验，确定病毒的型别和亚型，进行HI试验时，需同时进行4种标准抗原对照。 红细胞凝集抑制试验步骤 每孔加