蛋白在细胞凋亡中的作用机制研究.pdf

p53 蛋白在细胞凋亡中的作用机制研究 下载全文 加入收藏夹 点击 :101 下载 :1 Bad(Bcl-2 antagonist of cell death) 是 Bcl-2 蛋白家族的成员之一，是细胞凋亡的正调 控因子，正常情况下定位于细胞质中。像其它的 BH3-only 蛋白一样，使结合在 Bcl-2 或 者 Bcl-xl 上的 Bax 游离下来从而促进凋亡。 Bad 的凋亡活性通过它的 Ser112 ，Ser136 和 Ser155 三点的磷酸化来调控。在没有外界压力的细胞中， Bad 被几个蛋白激酶如蛋白 激酶 A(PKA) 或者蛋白激酶 B(AKT) 磷酸化，从而与 14-3-3 结合。但是，当细胞受到凋亡 刺激时， Bad 被迅速地去磷酸化并且迁移到线粒体上，从而诱导细胞凋亡。 肿瘤抑制因子 p53 在不同的刺激下分别调节细胞周期或者细胞凋亡。 它可以转录活化许多靶基因， 如 p21 ， Bax ，p53DINP1 ，Bid ，Puma 等等。但是，还有研究证明 p53 也通过转录非依赖的形式 来调节细胞凋亡，尽管这个作用的机制还没有被详细的阐明，但是最近的研究报道说明了， p53 可以直接转移定位到线粒体上， 与 Bcl-2 或者 Bcl-xl 结合后， 从而使 Bax 游离下来并 活化。同样， p53 还可以通过打断 Bak/Mcl-1 或者 Bak/Bcl-2 之间的结合来诱导细胞凋 亡。 尽管 Bcl-2 家族中的许多分子，例如 Puma ，Noxa ，Bax 和 Bid ，都可以被 p53 转 录调控， 这些已经被报道并且研究的很透彻， 但是 Bad 与 p53 之间的关系至今仍没有被报 道和研究。这里，我们报道了 p53 可以结合在 Bad 基因起始密码子上游的大约 6.6kb 的 区域，转录活化 Bad 的表达。我们还阐明了 Bad 可以和细胞质中的 p53 结合，从而阻止 了 p53 的进核，导致了 p53 对于 Bad 转录活性的降低。另外， Bad 可以介导 p53 定位于 线粒体上， 并且在线粒体上形成 Bad/p53 的复合物。 两个系列的证据说明了此结论： 其一， 当我们利用从 H1299 细胞中纯化的线粒体和纯化的 p53 蛋白，野生型的 Bad 或者突变体 的 Bad( 这个突变体仍然可以结合 p53 ，但是不能定位于线粒体上 ) 蛋白质共同孵育时， p53 只可以被野生型的 Bad 蛋白介导定位于线粒体上， 而不能被突变体的 Bad 介导并定位到线 粒体上；其二，利用小 RNA 干扰的实验，降低细胞内 Bad 的蛋白水平时，同时也减少了 p53 在线粒体上的定位。在线粒体上形成的 Bad/p53 复合物通过诱导 Bak 的活化和寡聚 化从而诱导了细胞凋亡。通过小 RNA 干扰试验减少 Bad 的表达水平明显的降低了 etoposide( 鬼臼毒素 ) 诱导的细胞凋亡。从而，我们的实验数据首次证明了 Bad 在 p53 转 录依赖的和非依赖的通路中扮演了双重的角色。总之，我们发现了 Bad 基因上游 6.6kb 处 的 p53 的结合作用区域，并且可以被 p53 转录活化； Bad 通过与 p53 结合，一方面抑制 了 p53 的进核，控制了细胞核内 p53 的量，从而使细胞内 Bad 的蛋白水平处于平衡，