生物学微生物的生长.pptxVIP

生长：原生质与细胞组分的增加；繁殖：菌体细胞数量的增加： 微生物的生长伴随体积增大和细胞分裂，所以，生长的概念中包含着繁殖。第一节 微生物纯培养的生长 本节提要：******微生物纯培养的生长微生物纯培养的接种方法微生物生长的测定细菌纯培养群体生长测定连续培养同步生长微生物纯培养的生长纯培养（pure culture）：单个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。 v对于微生物，由于其主要进行无性殖，故纯培养即为克隆。v建立纯培养，证实其纯度无可置疑并保持不受污染是微生物学家最重要的任务之一。微生物纯培养的生长一、获得纯培养的方法：?平板分离法?液体分离法?单细胞挑取分离法?选择性培养基分离法微生物纯培养的生长（一）.平板分离法：1、划线分离法：快速、方便。 分段划线（适用于浓度较大的样品） 连续划线（适用于浓度较小的样品） 扇形划线 方格划线分段划线法微生物纯培养的生长分段划线和连续划线微生物纯培养的生长2、稀释倾注分离法：可定性、定量。 方法：先取稀释液注入平皿，再注入45℃左右的培养基，将稀释液冲开培养基表面、中间均会出现菌落。微生物纯培养的生长3、涂布平板法（培养基表面出现菌落）简单易行，但易造成机械损伤微生物纯培养的生长1．液体分离法适用于细胞较大的微生物。用液体培养基对菌液做10倍系列稀释，使试管中只存在一个细胞，由此繁殖得到的后代必是纯培养。微生物纯培养的生长3.单细胞（单孢子）分离法在显微镜下用显微操纵器（单细胞挑取器）进行。4.选择性培养基分离（通常做成固体的培养基）微生物纯培养的生长二、纯培养的接种方法根据菌的生长速度的快慢来选择q斜面接种q液体接种微生物纯培养的生长（一）斜面接种：为保存菌种和获得大量菌种(1) 密 涂 布 法 ( 适 用 于 各 种 M ， 可 获 得 大量菌体)(2)蛇形划线法(适用于易扩散的M)(3)中央划线法(适用于生长快的M)(4)点种法(适用于真菌短时间保存菌种)微生物纯培养的生长（二）穿刺接种法： 用于接种试管深层琼脂培养基，以观察细菌运动及鉴定细菌用。 微生物纯培养的生长（三）液体接种法 用接种针在液面边缘1、小接种量：如左；2、用无菌滴管或移液管；3、直接倒入；4、利用无菌空气通过特殊 装置压入；5、利用负压吸入液体基中。 产生混浊搅匀、振荡三、微生物生长的测定微生物生长的测定（一）直接计数法：全菌数法（死菌+活菌）1．计数板计数法微生物生长的测定2．涂片染色法应用：可同时计数不同微生物的菌数，适于土壤、牛奶中细菌计数。方法：用镜台测微尺计算出视野面积；取 0.1ml菌液涂于1cm2面积上，计数后代入公式：每ml原菌液含菌数=视野中平均菌数×涂布面积/视野面积×100 ×稀释倍数微生物生长的测定3. 比例计数法? 通过细菌与等体积红细胞混合涂片，以细菌数与红细胞数的比例，折算样品中菌的含量。4．电子自动计数器计数法：利用液体与菌体的电导不同特点：快速、简便微生物生长的测定5．比浊法：? 用光密度（OD）在560nm波长处测溶液混浊度；? 特点：快速、简便；但易受干扰。6．滤膜法：? 菌数少于106个/ml时，一定体积样品（牛奶、自来水）通过膜过滤，然后将膜干燥、染色、透明，镜下计数。微生物生长的测定（二）间接计数法：活菌法1．平板计数法：广泛用于各种样品的检测方法：（1）涂布法（菌长在表面） （2）倾注法（菌长在表面和基内）优点：常用、较准确、可对不同种微生物做活菌计数。缺点： 时间长、人为误差大，有机械损伤。微生物生长的测定2．液体法：? 将待测样品做系列稀释，培养后，根据没生长的最低稀释度和出现生长的最高稀释度，应用“或然率”理论，计算出样品单位体积中细胞的近似值。3．微菌落法：? 一定体积的菌液+半固体培养基滴加在无菌玻 片上，培养2-4小时，显微镜下计数片上的微菌 落数。微生物生长的测定（三）测细胞物质的量1．干重法：方法：洗涤、离心、烘干、称重。特点：用于菌浓度高的样品，直接、可靠、准确。2．含N量测定法：总Pro量 = 总N量%× 6.25 微生物生长的测定3. DNA法：? 利用DNA可与3，5—二氨基苯甲酸—盐酸溶液 （2%）显示特殊荧光反应的原理而设计的。? 每个细菌细胞平均含DNA8.4×105mg生理指标测定法：即微生物分析法4.? 利用微生物的生长状态，测培养基中某物质的 含量，进行定性、定量分析。 如测耗氧量、发酵葡萄糖产酸量、维生素或氨 基酸消耗量，测算微生物的生长。四、细菌纯培养群体生长测定分批培养：指微生物在一定容积的培养基中，在特定培养条件下只完成一个生长循环（最后一次收获）的培养方法。（封闭系统）连续培养：指微生物在整个生长时间，以一定的方法（恒浊、恒化）使微生物持续的以较恒定的生长速率生长的培养方法。（开放系统）细菌纯培