分子生物学 第四章-RNA复制.pptVIP

第三章 RNA的转录RNA transcription 本章主要内容 3.1 RNA的结构、分类和功能 3.2 RNA转录 3.3 转录后加工 3.4 RNA 复制 （延伸讲解） 3.4 RNA 复制 依赖于RNA的RNA复制 双链RNA病毒的RNA复制 单链RNA病毒的RNA复制 以DNA为中间物的RNA复制 逆转录病毒的RNA复制 逆转座子 某些DNA病毒中的逆转录现象 3.4.1 依赖于RNA的RNA合成 以RNA 为模板合成 RNA，发生在 RNA 病毒生活史中 由依赖于 RNA 的 RNA pol 催化，RdRP，RNA-dependent RNA polymerase RdRP 一般为病毒基因组编码，需宿主细胞的辅助蛋白 RdRP 序列保守，只有 聚合酶 活性，没有 外切酶 活性 复制方向为5’ 3’ 多数在模板一端从头开始，少数需要引物，引物为共价结合的蛋白质或 5’- 帽子 易错、高突变的 RNA 复制，因为 RdRP 缺乏核酸酶的校对能力，其 错误率 比 DNA 聚合酶高104 倍 RNA 病毒 易发生突变，比 DNA 病毒快 106　倍 多数在宿主细胞质复制，少数在核中 对放线菌素D不敏感，但对核糖核酸酶敏感 单链和双链 RNA 病毒，其基因组复制机制不同 一、 双链 RNA 病毒的 RNA 复制 dsRNA 病毒感染宿主细胞，其基因组需用自身的 RdRP 转录合成 mRNA RdRP 以 负链为模板，转录携带帽子结构、无Poly(A)尾的单顺反子 mRNA, 长度与正链相同 在转录中，mRNA 与核糖体结合翻译成蛋白质 翻译的结构蛋白、RdRP，与 mRNA 结合形成 病毒质（viroplasm），再组装成非成熟病毒颗粒 在颗粒内以 mRNA 为模板，合成负链 RNA, 形成 dsRNA 二、 单链 RNA 病毒的 RNA 复制 ★ 正链 RNA 和负链 RNA 基因组的复制 基因组 RNA 具有 mRNA 的功能，可直接附着于胞质的核糖体，转译出病毒的非结构蛋白与结构蛋白。 非结构蛋白包括供病毒RNA复制所需要依赖RNA的RNA多聚酶等，结构蛋白则包括衣壳蛋白等。 基因组 RNA （+）经 RdRP 催化，作为模板合成互补的反基因组，antigenome, 即负链 RNA 中间物，再合成出新基因组 RNA （+） 1、 正链 RNA 病毒的 RNA 复制 烟草花叶病毒--典型的+RNA单链的复制 2、 负链 RNA 病毒 RNA 复制 基因组 RNA 是 mRNA 的反义链，病毒进入宿主后，需拷贝出与其对应的正链 RNA, 才能用于翻译病毒蛋白 病毒颗粒包装有自身的 RdRP，病毒侵入宿主，可迅速转录 mRNA 病毒 mRNA识别宿主mRNA并切割5’帽子结构进行作用，进入核糖体，翻译蛋白质　 流感病毒属于此类型 3.4.2 以DNA为中间物的RNA复制 一、逆转录病毒的RNA复制 上世纪60年代，Howard Temin观察到某些RNA病毒的复制和增殖受到DNA复制和转录的抑制剂—放线菌素D的抑制，于是他大胆地推测这些病毒的生活史中有DNA中间物的存在或者有从RNA到DNA的逆转录过程。 1970年，Temin和David Baltimore 各自从RNA肿瘤病毒中纯化到催化以RNA为模板合成DNA的逆转录酶，为逆转录现象的存在提供了最直接的证据。 Termin和Baltimore的发现使“中心法则”不得不进行修改，加上了逆转录内容。 所有的RNA肿瘤病毒都是逆转录病毒 RNA病毒中的癌基因是宿主细胞正常癌基因的变化形式 逆转录病毒的例子： 劳氏肉瘤病毒（RSV） 猫白血病病毒 小鼠乳房癌病毒 艾滋病毒（HIV） 逆转录病毒的RNA复制 逆转录病毒基因组RNA的结构 非编码序列：5端帽子结构、5端末端直接重复序列（R）、5端特有序列（U5）、引物结合位点（PBS）、剪接信号、引发第二条链合成的多聚嘌呤区域（PPT）、3 端多聚腺苷酸尾巴、3 端特有序列（U3）和3端末端直接重复序列。 编码序列：3个结构基因，它们是编码MA、CA和NC的gag基因，编码逆转录酶、整合酶和蛋白酶的pol基因以及编码SU和TM的env基因（肿瘤病毒中还含有编码癌蛋白的癌基因onc）。 逆转录病毒的生活史 附着与融合 核心颗粒释放和逆转录 原病毒DNA进入细胞核 整合 转录及后加工 转录物输出到细胞质 翻译及翻译后加工 新病毒装配和出芽释放 艾滋病毒完整的生活史 逆转录酶的结构与功能 具有三个酶活性： 依赖于RNA的5→3DNA聚合酶活性，该活性用来催化负链DNA的合成； 核糖核酸酶H活性，该活性用来水解tRNA引物和基因组RNA； 依赖于DNA的5→3DNA聚合酶活