单一和多重步骤质谱分析之高正确性.docVIP

Modular Mass Spectrometric Tool for Analysis of Composition and Phosphorylation of Protein Complexes Abstract 　　單一和多重步驟質譜分析之高正確性、靈敏度和速度的結合加強有關複雜生物樣品全套的細部資訊收集。為了完成這些性質，我們在一個模組的質譜工具上，組合兩種高效能的協助分析物去吸附物的雷射離子化(MALDI)質量分析儀，而且應用這工具針對蛋白質錯合物的分析組成成份和後平移調整。在一個樣品的研究上，顯示出啤酒酵母菌的研究，在它的組成成份上，後期促使錯合物(APC)並且解釋磷酸化作用的位置。一般而言，我們所描述的模組觀念針對裝配質譜操作複雜的生物樣品全套分析，將兩種MALDI和ESI離子來源成為有力的質譜工具，是有用的。 Introduction 　　最近這幾年，生物樣品的質譜(MS)分析已經逐漸增加承擔複雜蛋白質混合物的直接分析，經常有不同組成的目標需要精細的特性描述。此一趨勢傾向於曾經更大的樣品複雜度，藉由有力的MS工具快速發展，已經能夠使用和轉換。最近的MS的一般特徵是大部份是利用不同的強度和性質，組合一連串的多種質量分析儀，結果在串聯的儀器上，藉由各別的組成，擁有難以達成的能力（圖一A）。例如：triple quadrupole (QQQ)、Quadrupole/Time-of-flight (QTOF)、Quadrupole/Ion trap (QTRAP)、Time-of-flight/Time-of-flight (TOF-TOF)等多種一前一後的MS已經被證明對分析研究是有效力的工具。 　　串聯的儀器能夠組合高質量的準確性和高速的測量，大大的使得分析複雜的混合物變容易。例如，TOF、FT-ICR和Orbitrap質量分析儀成為IT等的增加，經由多重步驗的MSn分析，已經大大的增加測量的正確性。兩種類型MS的物理整合，結合它們最好的效能，在選擇離子上，前離子選擇步驟和後MSn實驗之間，提供快速連結。這樣的選擇是便利的，速度與正確性對於分析的成功都是重要的，照原樣，例如：MS直接與一個線上的HPLC系統串聯。 　　在串聯多重MS的物理聯結有一些不利條件。針對不同MS和一連串儀器的操作模式中，最好的操作態狀有極大的不同，為了其中一部MS有最好的效能，需要犠牲別的機器，就會產生需要妥協的問題。針對這個問題，分離混合儀器中的部份零件是解決的方法。當然，一個MS模組工具從幾種MS被組合，沒有物理結合他們在一部儀器上。幾種MS被利用作為分離模組，優化分析的每一個特殊類型，和應用反過來提取綜合有關樣品以數據依賴方式的訊息。那些收集到的資料很快的利用電腦分析，基於分析資料的結果（是在先前的儀器和經過儀器到下一個樣品），產生一組指示。在如此的一個模組工具中，分析的理論速度僅限制在樣品分析的速度（就是從這一台MS到另一台，樣品的殘留部份在不同的儀器和轉移的速度）。 　　基於上述觀念的一個模組儀器簡圖舉例如圖一B，多重的MALDI儀器能夠簡單的結合成一個系統，利用一個可交換的MALDI目標板。類似的，多重的ESI-MS能夠組合藉由分流技術引導延遲，介於在不同儀器的離子來源樣品到達時間。在這個例子，時間延遲是大於上游儀器的使用率，所以數據依賴指示能夠產生和傳達到下游儀器。 　　這個觀今已經被利用在組合高解析度、高質量準確度MALDI- QqTOF儀器和高速度、高靈敏度的MALDI-IT質譜。這個組合證明了非常有用，對於了解很多有挑戰性的生物問題。最初利用組合儀器的研究，是用於在內部的調整儀器。然而，最近類似的質譜儀器之商業介紹已經公開發展前途，可以在任何實驗室發展這種方法。 　　這份報告描述一個質譜的模組工具，以兩個MALDI質譜儀為基礎，是代理的TOF (PerkinElmer)和vMALDI-LTQ (Thermo Electron)。我們證明此工具在蛋白質錯合物組成研究上的應用和鑑定啤酒酵母菌後期促使錯合物(APC)的下面單元的磷酸化位置。 Result 質譜儀的結合效能 　　在發展我們結合質譜系統的第一步驟，我們設計一個磁性的MALDI目標，這可以交換代理的TOF和vMALDI-IT儀器。這個目標允許單一樣品利用兩台儀器的連續分析（見方法部份）。我們在單一10-15莫耳級的儀器，分析一個已知六個peptide的混合物，評估我們組合質譜系統的效能。分析的第一步驟是應用代理的TOF儀器，快速收集高解析度、高質量準確度的MS資料。代理的TOF質譜儀是一台一次使用的儀器，針對單一步驟的MS光譜快速測量。圖二A顯示peptide混合物的MS光譜，在三十秒內獲得。我們至少得到六個peak，訊號對雜訊的比例超過1.5:1。被觀察到的解析