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- 2020-05-17 发布于上海
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米根霉整合表达载体构建及其遗传改造;背景及研究进展; 目前对于微生物菌株改造一般有两种策略:一、改造已有发酵能力的菌种,将其与底物利用相关的基因进行改造,增强其底物利用能力;二、选取不具备此种发酵能力,但是易于进行基因工程改造,或已经广泛应用为各种外源基因宿主,同时具备高蛋白表达量的菌株(常用的如大肠杆菌及各种酵母菌等等),导入关键酶基因。
大多数丝状真菌以PEG/CaCl2介导原生质体转化、电转化以及基因枪转化为主要的转化手段,营养缺陷标记与抗生素抗性标记作为筛选标记。目前脲嘧啶缺陷作为筛选标记应用比较广泛,相对的,对于宿主菌的要求也比较高(一般需自己诱变选育对应营养缺陷型菌株或者与菌株拥有者交流索取)。以抗生素抗性(如新霉素、杀稻瘟素S、其他部分乙酰胺类抗生素,以及逐渐广泛应用于丝状真菌遗传转化的潮霉素等等的抗性)为选择标记在近年来发展较为迅速,随着多种抗生素抗性基因的分离及功能分析鉴定的完成,其作为一种方便并适用范围广的筛选方法被用于越来越多的丝状真菌转化研究当中。
大多数丝状真菌采用整合型转化,通过单交换以同源或随机插入重组的方式整合到基因组中。尤其是对于米根霉,由于目前尚没有能在米根霉菌体内以稳定的形式自主复制的质粒,因此构建整合型质粒仍为第一选择。;;目前所需要做的工作;整体研究思路;;木糖代谢限速步骤关键酶分析;以木糖为发酵底物比较X
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