植物快繁与脱毒培养.pptxVIP

第四章 植物离体无性繁殖与脱毒技术;有性繁殖;目前，植物脱毒离体快繁技术仍是植物细胞工程技术应用的主流之一； 是生物技术应用于生产并取得显著效益的一个领域，已广泛应用于花卉、蔬菜、果树、药材和林木的种苗生产。;;一、离体无繁殖的概念和意义 离体无性繁殖：在离体培养条件下，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等各种器官、组织和细胞进行无菌培养，经过不断地切割繁殖，使其再生形成完整植株，在短期内获得大量遗传性均一的个体的方法。 又称快速无性繁殖或微繁殖、微体繁殖。 试管苗：由离体无性繁殖获得的植株称试管苗。 植物脱毒：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中侵染的病毒，生产健康的繁殖材料。;植物离体无性繁殖的意义;二、离体无性繁殖的类型;高等植物的每一个叶腋通常都存在着腋芽，其中每一个都能发育成为与主轴相同的枝或苗，但在自然生长情况下由于顶端优势(terminal dominance)的存在大多数腋芽受到抑制，处于休眠状态。; 丛生芽增殖;单茎节增殖;以顶芽和腋芽发育进行增殖的特点： 利用外植体上已有的芽分生组织，促使其萌发形成枝条或芽，方法简单，能高度保持遗传稳定性，繁殖速度较慢。 适用于绝大多数植物的繁殖，对具有特殊观赏价值的嵌合体(chimera)园艺植物来说，也是唯一能够保持其原有嵌合特性的繁殖途径。;2、不定芽(adventitious bud)型;不定芽增殖的特点： 直接分化途径产生的不定芽： 遗传稳定、繁殖速度较快 间接分化途径产生的不定芽： 容易产生变异;3、体细胞胚（somatic embryo）型;4、原球茎(protocorm)型;繁殖特点： 兰科植物所特有的繁殖方式； 增殖速度快； 成苗率高。;三、植物离体无性繁殖的技术;（一）供体材料的准备：Stage0;（二）无菌培养物的建立（stage1）; 外植体培养一段时间后可形成一个或多个芽，或带根的植株、胚状体、愈伤组织、原球茎等，如果将这些材料进行切割并继续培养，可以进行连续的生长繁殖的话，那么可认为已经建立了无菌培养物，可以进入离体繁殖的下一个阶段。;（三）增殖培养（stage2）;繁殖（或增殖）速度的计算; 培养物的增???速度和植物种类、外植体类型、增殖方式、培养基成分及培养方式等有关，不同培养物之间的增殖速度差异很大。 一般来说对同一种植物，增殖培养阶段的每次培养都是相同。增殖速度一般是稳定的。 增殖培养是一个重复进行的培养过程。随着培养代数的增加，培养物的数量成几何数增加。;月增殖倍数为2时;（四）试管苗生根 （stage3）;1、壮苗培养 目的：使芽苗伸长而健壮 ，有利于生根。壮苗阶段不需要芽苗量的增殖，而是为了获得足够数量的大苗用于生根诱导，有时也将这一处理称为芽苗的伸长阶段（elongation）。 方法：降低或去除细胞分裂素，增加碳源。植物类型不同，壮苗培养时可以以单个的枝或丛状的芽苗进行。;2、 试管苗生根诱导;方法：分离单个的大苗、小芽丛、枝，转入生根培养基进行培养。;（2）试管外生根;（五）试管苗移栽和管理（stage4）;2、移栽（transplantation）的一般方法;试管苗的出管移栽，要经历一系列由环境到生理功能及结构上的剧烈变化过程。 环境上： 无菌-有菌；高湿度--低湿度；弱光--自然条件下的强光。 组织结构及生理功能上： 叶片表面的角质层和蜡质层逐渐形成；气孔的适应能力、叶片的光合能力和根的主动吸收能力需要逐渐发展；异养-完全的自养。;移栽的一般步骤： 1）.开瓶锻炼：放在较强光照条件下或温室中，打开瓶口，锻炼1～2周左右； 2）.试管苗就可以从培养瓶内取出，小心的洗去根上附着的培养基，移栽进合适的基质中； 3）.精心管理，直至成活； 4）.进一步培育成商品苗。;1、鉴定的意义 由于培养时，取材部位不同、器官发生途径不同。供体材料的遗传稳定性不同。培养基中各种物质，特别是植物激素，对植物细胞构成化学诱变环境。 那些在遗传上可塑性强的种和那些易于通过不定芽再生的植物种的再生植株群体，可能会发生变异，故需要认真进行鉴定。;2、鉴定方法 ①细胞学及分子生物学鉴定：对再生株群体抽样检查根尖染色体数目、减数分裂期的染色体行为及分子水平变异等进行鉴定。 ②形态鉴定：在田间对再生株的植物学性状进行鉴定，发现变异株再作细胞学鉴定。;3、鉴定的内容：P67 ①商品性状： ②健康状况： ③遗传稳定性： ④农艺性状：;四、影响植物离体快速繁殖的因素（P67-68）;五、离体无性繁殖过程中的技术问题;一、病毒在植物体内的分布、传播和危害;病毒在植株体内的扩散：