中医证的动物模型研究思路.ppt

中医“证”的动物模型 理想动物证候模型制备原则 1.症状、病理变化与临床证型相似。 临床同一证型可能有多种不同的病理状态；同一证的模型也可有多种原因造成。 模型不仅要与证对应，而且要尽可能与特定的病理对应，病因相似。 病证结合模型研究思路 1. 同病不同证。 如不同方法造成的消化性溃疡病模型对不同的辨证施治方药反应不同，认为其属于不同的证候。 又如用肾动脉狭窄法形成的高血压模型属肾阴虚型；高肾上腺皮质激素制备的高血压模型属于肾阳虚型。 应用注意 比较成熟、科学合理的中医证 (病)动物模型甚少。大部分尚处于探索阶段。 对一个药物的药效需要用几个模型从不同侧面验证。切忌单凭个别动物实验指标的测定结果就作绝对的肯定或否定。 第二节 现有几种证的动物模型研究简介 一、 阴虚证 造模材料：成年大鼠，200～250 g；小鼠，7～8周龄，左旋甲状腺素钠或甲状腺素。 造模方法：成年大鼠以甲状腺素1-10 mg／kg灌胃，连续3周；或小鼠以L－甲状腺素钠1-20 mg／kg皮下注射，连续4～5d。 原理：甲状腺功能亢进主要表现为肾阴虚证，通过给实验动物大剂量使用甲状腺素，复制出甲状腺功能亢进性肾阴虚证动物模型。呈现肝、肾组织耗氧量增加等。 阴虚证造模后的指标变化： 动物出现体重减轻，体温升高，心率加速，躁动不安，饮水量、耗氧量增加，痛阈下降。肝脾核酸合成增加，外周微循环血管开放数目增加，血流加速，心肌、肾脏和脑组织β受体数量均增加；红细胞、肝、肾组织的Na+，K+-ATP酶活性增高。 益气养阴泻火药对甲亢动物的影响 操作方法：取体重18～28g小鼠，每天以三碘甲状腺氨酸(T3)，1mg／kg 灌胃，连续3～5天。 益气养阴泻火药复方，制成2g/ml煎剂，于造型同时给予0.6ml／只灌胃。 结果，甲亢组肝组织耗氧量较正常组增加，治疗组则降低之。 羟基脲型阳虚模型建立法 原理 阳虚动物的虚损表现与核酸代谢，特别是脱氧核糖核酸(DNA)代谢低下有关。抗肿瘤药羟基脲能抑制核苷酸还原酶，从而抑制DNA合成，影响蛋白质代谢，出现一系列虚损症状。 操作方法 取体重22～28g雄性小鼠。以羟基脲5～15mg／只灌胃。连续7～15日，可出现阳虚症状（以7.5mg较为合适）。 例： 取小鼠以羟基脲7.5mg／只，灌胃造型，治疗组以补阳药(淫羊藿和肉苁蓉等量制成煎剂，浓度为生药1g／ml，煎剂0.5ml／只，连续给药13日。 末次给药后每只小鼠腹腔注射氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR)6微居里，1h后取动物肝、脾，测定DNA合成速率。结果：与阳虚组比较，补阳组肝脾DNA合成率较高，体重增加，耐冻时间较长。 甲减型阳虚模型建立法 切除甲状腺造型法 原理 甲状腺功能减退者(甲减)，体内的代谢普遍减慢，基础代谢率降低，中医辨证甲减患者大多具有脾肾阳虚症状，以温肾补阳药治疗，临床症状好转，基础代谢率升高，血浆cAMP升高。因此切除甲状腺造成的“甲减”动物模型，可模拟人类的阳虚证。 操作方法 取体重100～150g大鼠。在乙醚麻醉下切除双侧甲状腺，造成甲减大鼠模型，手术6～8星期后用于实验。 三、血瘀证动物模型 1．高分子右旋糖酐静脉注射造模法 造模材料：高分子右旋糖酐又名高分子葡聚糖，平均分子量为20万～40万；家兔或新西兰大白兔。 造模方法：高分子右旋糖酐，经加热，使完全溶解于生理盐水中，配成10％浓度的溶液。用9号针头经耳缘静脉，以15ml/kg的剂量快速注入10％高分子右旋糖酐，全量应在3min内推注完毕。一般在推注到全量1／3左右时，微循环中即出现以血细胞聚集为主的各种微循环障碍表现，并可持续12～24h。 造模原理： 高分子右旋糖酐能被红细胞吸附，从而在红细胞间起着桥梁作用，导致红细胞聚集，血流阻力增加，循环不畅。 造模后的指标变化：除出现口唇紫绀，舌质暗红等血瘀症状外，还可见体内微循环血流缓慢、血细胞聚集、微血管周围有渗出及出血等现象，血黏度升高、红细胞电泳时间延长等明显的微循环障碍特征。 四、 血虚证动物模型 1．环磷酰胺造模法 造模材料：昆明种小鼠，20～24g，雌雄各半，环磷酰胺。 造模方法：动物腹腔注射环磷酰胺50～100mg／kg，每天1次，连续注射2～4d，然后饲养观察。 造模原理：环磷酰胺破坏骨髓造血细胞增殖能力，所造成的贫血与临床再生障碍性贫血相似，可作为血虚的动物模型。 六、热毒证动物模型 发热是实热证的重要体征之一。许多清热方、药都有明显解热作用，如白虎汤、黄连解毒汤、银翘散、大青叶、板蓝根、玄参、竹叶，知母、石膏等都有明显解热作用。解热试验是研究清热解毒的常用指标。 肝、脾DNA测定原理 分别取出肝、脾，用冷生理盐水洗净，滤纸吸干表面水分，称重，在冰浴中剪碎，加冷匀浆液（