生化与分子生物学实践.pptxVIP

第一节 生物成分的分离与测定技术;生命活动的主要承担者，一 切性状的体现者是什么？;1.原理： 依据蛋白质的各种特性将不同种类的蛋白质分离，再依据蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间的差异进行纯化。 2.步骤：;（1）样品处理（释放蛋白质）：先将生物组织进行机械破碎，再根据细胞的特点选择不同的细胞破碎方法（常用的有——、——、——等？）破碎细胞，待细胞破碎后，各种蛋白质被释放出来。 （2）粗分离（抽提蛋白质）：根据蛋白质的不同性质，选择不同的溶剂进行抽提。例如，酸性蛋白质可用——抽提，水溶性蛋白质可用——抽提，脂溶性蛋白质可用——抽提。 （3）纯化： a.原理：根据蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间在分子大小、溶解度、所带电荷的多少、吸附性等方面存在的差异进行的。 b.方法：有——、——、——等。 （4）纯度鉴定;3.电泳： （1）概念： （2）原理：利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、性状的不同使带电分子产生不同的泳动方向和速度，从而实现样品中各种分子的分离。 （3）泳动的特点：带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，速度就越快，反之越慢。;1.芳香油的来源：芳香植物的花、茎、叶、果实等。 2.芳香油的特点：挥发性强；易溶于有机溶剂。 3.提取方法： （1）蒸馏法（水蒸气蒸馏法） 原理：利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来。 步骤：a、水蒸气蒸馏；b、分离油层；c、除水过滤。 使用范围：提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油。 （2）萃取 原理：使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后就可以得到芳香油。;课题目标： 1、了解植物芳香油的来源，针对原料的不同特点，采用适宜的提取方法； 2、结合橘皮精油的提取，正确选择提取方法，弄清植物芳香油提取的具体操作步骤。;3、使用水蒸气蒸馏装置的注意事项有哪些？;4、橘皮精油的主要成分是什么？为什么用压榨法提取？;植物芳香油的提取方法;;二、实验材料及用品;精油提取器;三、实验步骤;;课外小知识; 如从玫瑰花中提取出的玫瑰油称为“液体黄金”，多用于制造高级香水等化妆品，是纯天然的护肤品。 功效：具有极好的抗衰老和止痒作用，能够促进细胞再生、防止肌肤老化、平抚肌肤细纹，还具有使人放松、愉悦心情的功效 。;1、蒸馏时要提高产品质量，应采取的措施是 A 提高蒸馏温度，延长蒸馏时间 B 提高蒸馏温度，缩短蒸馏时间 C 降低蒸馏温度，缩短蒸馏时间 D 严格控制蒸馏温度，延长蒸馏时间;2、用于提取植物芳香油的植物器官包括 A 花、茎、叶 B 树干、树皮 C 根、果实、种子 D 以上三项都是 3、玫瑰精油被称为“液体黄金”，提取玫瑰精油的方法有 A 只用水蒸气蒸馏法 B 可用蒸馏法和压榨法 C 可用蒸馏法和萃取法 D 可用压榨法和萃取法;4、在用水蒸气蒸馏法制取玫瑰乳液提纯过程中，先后使用NaCl和无水Na2SO4的作用分别是 A 分层、吸水 B 溶解、吸水 C 吸水、分层 D 分层、萃取;谢 谢！;第二节 分子生物学技术;一、分子生物学进展;二、PCR技术（聚合酶链式反应）;PCR反应中的主要成份 1. 引物（两种寡核甘酸） 2. 反应物（4种脱氧核苷酸） 3. DNA聚合酶（常用Taq 聚合酶） 4. 模板DNA 5. Mg 2+ （提供反应的离子条件） 6. 反应缓冲液（提供反应的溶液体系）;PCR是一种由引物介导的选择性体外扩增DNA的方法。 包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(40 ℃~60 ℃)下与模板上的目的序列通过氢键配对; (3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度 下(72 ℃左右)，以目的DNA为模板进行合成。 由这三个基本步骤组成一轮循环，理论上每一轮循环将使 目的DNA扩增一倍，这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板，所以经30轮循环就可使DNA扩增出230 个拷贝。;PCR 循环 – 第一步 –变性(94℃);PCR 循环- 第二步 –退火(40 ℃-60 ℃);PCR 循环 - 第三步 – 链延伸(72 ℃左右);第1个 PCR 循环完成后 –  得到两个拷贝的靶序列;30次循环后靶序列扩增的数量;; 细胞的破碎的方法：;; 物理法