手性化合物色谱优化.ppt

手性化合物色谱优化 手性化合物色谱优化 LOGO 使用纤维素三（3 - 氯-4 - 甲基苯基氨基甲酸酯）作为手性选择剂和 极性有机流动相来优化手性酸性化合物对映体分离的液相色谱 生物化工 丁达繁 3140221 三、材料和方法 3 一、摘要 1 二、引言 2 四、结果与讨论 4 五、结论 5 6 目录 一、摘要 利用含氯纤维素手性固定相和极性有机流动相来行优化手性酸性和两性药物对映体的液相色谱。流动相的主要溶剂是乙腈，将温度固定在25?C，固定相以纤维素三（3 - 氯-4 - 甲基苯基氨基甲酸酯）作为手性选择器。在筛选步骤中酸性和碱性添加剂的性质和浓度都发现对保留，选择性和分离有显著影响。乙酸（ACA）被选定为酸性添加剂，因为它可比三氟乙酸（TFA）和甲酸（FA）使更多的酸性化合物的对映体分离。测试的三种基本的碱性添加剂中，二乙胺（DEA）比丁胺（BUA）和三乙胺（TEA），对于对映体分离和选择性，有更好的效果。优化是采用面心中心复合设计有两个影响因素，即浓度为（0.1-0.3％）的乙酸和浓度为（0.01-0.1％）的二乙胺（DEA）。 二、引言 手性许多影响都与手性药物的对映体可以具有不同的药理活性有关。手性药物的对映体的生产以及对映体的组成的控制和判定，已经成为制药业和监管机构的关键问题。因此，许多分析和制备技术已经开发了用于手性化合物的对映体分离。在这些技术中，液相色谱（LC）已成为这些分离的必备工具。 尽管大多数的对映体分离的可在液相色谱中的手性固定相来进行，但是应当强调的是，不存在通用的手性固定相。因此，目标手性药物的分离依赖于手性固定相（CSP）和液相色谱（LC）流动相之间适当组合的选择。 已经报道的文献中，使用的多糖基的手性固定相在正相，反相或极性有机流动相模式中，并不包括酸性或碱性添加剂的流动相的重要作用。然而，这些添加剂的性质和浓度已经显示出影响手性化合物的保留，选择性和对映体分离。因此，除了使用各种手性固定相，选择不同的酸性或碱性添加剂对对映体选择性很大的影响，这在极性有机相中使用含有氯纤维素基的手性固定相的碱性化合物的对映体分离上已经有所体现。 本文描述了酸性和两性离子的化合物对映体分离的优化，体现在极性有机流动相中使用纤维素三作为手性选择剂的手性固定相。此手性固定相的分辨率已经使用有很大的结构和极性差异的12种酸性或两性药物作为代表性例子和乙腈作为流动相主要成分进行了评估。为了实现这个目标，首先进行单因素筛选步骤以选择可能影响这些液相色谱系统保留，对映体分离和选择性的因素。然后，用面心中心复合设计来推导这些化合物的对映体的最佳液相色谱条件。 1、试剂和仪器 卡布洛芬，苯氧苯丙酸，氟比洛芬，酮洛芬，酮咯酸，2 - 苯基丙酸，2 -苯氧基丙酸、丙谷胺、吲哚洛芬， 布洛芬、氯噻酮、甲酸（FA）和乙酸（ACA）、三氟乙酸（TFA）、二乙胺（DEA）、三乙胺、丁胺（BUA）、乙腈（ACN）等 色谱系统等 三、材料和方法 2、解决方案 实验所使用的流动相由乙腈，酸性添加剂（TFA，FA或ACA）和碱性添加剂（BUA，DEA或TEA）的合适比例（体积/体积）混合制备的。 3、色谱条件 流动相是含有酸性和碱性添加剂的乙腈以1.0 mL/ min恒定流速构成的。进样量为20微升。分析物在240nm处进行检测，温度固定在25?C。 四、结果与讨论 4.1筛选 4.1.1酸性添加剂性质的影响 如可从表1中可以看出，所研究的手性化合物酸性添加剂（即甲酸、三氟乙酸和乙酸）的性质，在流动相中强烈影响着保留，对映体选择性和对映体分离. 图.2A中酮咯酸对映体分离的典型色谱图显示出，由乙酸替换三氟乙酸或甲酸对使用3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯的手性固定相的保留，选择性和对映体分离有着显著效果。因此，乙酸可以被认为是最有效果的酸性添加剂，选择用于优化步骤中。 4.1.2乙酸浓度在流动相中的影响 假设在流动相中增加乙酸的浓度（0.05?0.2％），将会减少分析物对映体的保留。除了氯噻酮和氧氟沙星之外所有研究的12种化合物对这个假设进行了验证（见表2）。此外，在流动相中所测试的化合物增加乙酸浓度会轻微改变对映体分离的值。然而，这种增加似乎主要是峰值效率的提高，而选择性值几乎不变。显然乙酸在流动相中的浓度是考虑到在优化步骤的一个重要因素。 4.1.3 碱性添加剂的性质和浓度在流动相中的影响