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层析工艺验证;简介 层析验证的先决条件 工艺风险评估 原材料 工艺特性研究 分析方法 微生物负载和内毒素控制 研发和特性研究文件 层析柱工艺验证 一致性批次：生产规模验证 小规模验证研究 验证文件 后验证活动 持续监测和维护 变更控制 ;定义：层析工艺验证是证明层析柱分离工艺能始终如一的按照批准的方案、既定的操作参数执行。;;以上是理想状态，不同项目的活动和顺序是可变的;工艺风险评估 工艺开发和特性研究的早期阶段：风险评估可将资源集中在最有可能对产品质量带来风险的操作参数或杂质。 工艺开发和特性研究的后期阶段：风险评估促使工作有条不紊。 规模放大：回顾所有操作参数和范围，评估和确认潜在风险，识别缺失数据。风险评估结果可能指出需要额外的特性研究。 工艺开发和特性研究完成后，关键步骤过程控制知识建立后：识别和分级潜在工艺风险，必要情况下，可开发一个降低风险的措施。;原材料 建立原材料质量标准和供应商变更控制程序。 正式工艺验证之前，原材料应经过确认。 层析填料有一些独特因素：通常是单一来源，很少有备用填料能执行同一功能，没有法定标准，对工艺结果有极高的影响。 层析不应采用动物源性的原材料。 ;工艺特性研究 目的：建立工艺知识，包括可接受范围、设计空间、失败边缘。 工艺特性研究要获取设定范围内的工艺操作参数（输入）是如何影响工艺性能（输出）的，据此鉴定关键操作参数、定义目标设定点和可接受范围。 工艺特性研究主要采用小规模研究。通过各种统计学方法设计实验，以更少的实验获得更多的数据。;工艺特性研究 在项目开发的早期阶段（如临床I期前），可以只开发层析步骤，不定义最佳操作范围。当产品即将获得许可，再来优化生产的操作参数。 特性研究的基础：设备和设施的能力、已开发的工艺、理论知识、以往经验、供应商建议、文献、生产历史。;工艺特性研究 特性研究应集中于影响层析性能的参数。例如，在离子交换操作，应评估上样蛋白的pH和离子强度、冲洗和洗脱条件、上样载量的影响。其他运行参数的范围（例如，温度、装柱情况、??清洗条件），可能对工艺性能的影响较小。它们也应进行测试，以建立一个稳定的工艺。;工艺特性研究 最终选定的范围应该跨越设备的已知变化和偏离。 参数的相互作用，可能会对性能产生多因素的影响，使用实验设计（DOE）方法可进行有效地测试。;小规模模型 如何证明小规模和生产规模的等效性？ 通常通过在既定参数下多次运行并比较结果来实现。 评估影响工艺一致性的参数，如收率、洗脱图谱、洗脱体积和/或保留时间 评估代表产品质量的参数，如样品纯度、工艺相关和宿主细胞相关杂质的水平。 ; ;操作参数的识别和分级 为了建立低风险的工艺控制策略并将验证集中于保持产品质量，把操作参数分为四类：;;工艺稳健性 定义：工艺稳健性是指工艺在一个较宽的操作范围下，能始终如一且可靠地生产出符合预定指标的产品。一个稳健的纯化工艺不受内源性变化的影响。;内源性变化 由于细胞培养/发酵的生物差异，原料会变化。这会导致产品效价、质量和宿主细胞杂质水平、或工艺相关杂质（细胞培养基成分）等的变化。 样品长时间存放也会导致产品变化。 围绕设定点波动的动态工艺控制也会带来变化。 在极端条件下（由特性研究确定）运行，结果会有极大差异。;在定义工艺设计空间时，要考虑以下几点： 原料差异性 工艺差异性 工艺相关杂质 最差情况工艺能力;原料差异性： 为了有效的评估正常发酵/细胞培养差异性（效价、产品变异、宿主细胞杂质、工艺相关杂质、粘度）的影响，可能的话要测试多批原料。 ;工艺差异性： 一些工艺条件和保存时间会影响产品质量。例如，蛋白A采用亲和层析，低pH洗脱可能会导致样品发生聚合，或是离子交换层析时高pH可能会导致样品大量脱氨化。在这两种情况中，必须证明在保存期限内，下游工艺步骤可以将这些变异体降低至可接受水平。 ;工艺相关杂质： 工艺相关杂质可能来自发酵（比如核酸、抗生素）或来自下游工艺（比如蛋白A配基脱落，缓冲液组分）。检测这些组分的去除，要采用上述研究的物料。另外，还可以进行掺标研究，特别是分析方法不适用或不够灵敏时。;最差情况工艺能力： 指在正常操作范围内处理极端原料，或者在最宽的可接受范围内处理正常原料。 ;分析方法 纯化的目的是去除工艺相关杂质、产品相关杂质和污染物。因此在层析验证研究中使用的分析方法应当能够可靠的检测和定量这些物质在不同缓冲体系中的预期范围。要适当控制这些方法以保证结果可靠。用于特定时期的分析方法，比如验证研究，应证明它们适用于预期目的（比如灵敏度、线性、精度、准确度）来确认。用于日常检测的分析方法也应验证 ;微生物负载和内毒素控制 层析步骤一般不在无菌条件下进行，因此必须适当控制微生物负载。在选择填料、清洗液、保存条件和工艺设备时,必须考虑生物负载控制。一旦有微生物