第三章分子生物学常用技术和基本原理.docVIP

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  • 2020-06-07 发布于江苏
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第三章分子生物学常用技术和基本原理.doc

第三章 分子生物学常用 技术和基本原理 第一节 分子生物学常用工具酶 一、限制性核酸内切酶与DNA分子的体外切割 1 、来源与作用:是原核生物中的一类防御武器,可 以将外源性DNA分子切割成大小不同的片断,而细 菌本身的DNA由于修饰酶(通常为甲基化酶)的保 护作用,免受降解。与甲基化酶共同构成细菌的限 制修饰系统,限制外源DNA, 保护自身DNA。1970 年首先在流感嗜血杆菌中发现Hi nd Ⅲ 。 2、定义: 2、命名: 3、分类:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ (基因工程技术中常用Ⅱ型) 4 II 、 型限制酶的特点 Ⅱ类酶识别序列特点—— 回文结构(palindrome) GGATCC CCTAGG 切口 :平端切口、粘端切口 HindⅡ Bam HⅠ GTCGAC CAGCTG GGATCC CCTAGG GTC CAG + GAC CTG G + CCTAG GATCC G 平端切口 粘端切口 同功异源酶 来源不同的限制酶,但能识别和切割 同一位点,这些酶称同功异源酶。 Bam HⅠ GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC + G BstⅠ GGATCC CCTAGG G + CCTAG GATCC G 同尾酶 有些限制性内切酶虽然识别序列不完全 相同,但切割DNA后,产生相同的粘性末 端,称为同尾酶。这两个相同的粘性末端称 为配伍未端(compatibl

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