高效液相色谱质谱联用技术原理与应用.docVIP

高效液相色谱-质谱联用 技术原理与应用 什么是液质联用(LC/MS) ? LC: 液湘色谱仪 一种能够把液体混合物中的不同组分根据在 色谱柱中保留时间不同进行分离,检测及收集的仪 器 ? MS: Mass Spectrometer 质谱仪 一种能够把分子转化生成带电离子,并在气 态中根据质荷比(m/z : m质量 z分子所带电荷数 ) 的不同把离子进行分离并进行检测的仪器. 质谱技术： ? 质谱分析过程：样品通过进样系统进入离子源，由于结构性 质不同而电离为各种不同质荷比（m/z）的分子离子和碎片 离子，而后，带有样品信息的离子碎片被加速进入质量分析 器，不同的离子在质量分析器中被分离并按质荷比大小依次 抵达检测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质量谱， 也就是质谱 (mass spectrum)。 ? 质谱：按离子的质荷比的大小依次排列形成的图谱 M1 M2 (M1+1)+ (M2+1)+ (M1+1)+ (M2+1)+ 离子源 质量分析器 准分子离子 (M+1)+ 多电荷离子 (M+nH)n+ 质谱分析系统的基本组成 大气压 真空系统 进样系统 离子检测器 离子源 质量分析器 数据采集 系统 真空系统 机械泵 10-3 - 10-4 torr (1atm =760 torr) 分子扩散泵 10-6 torr 进样系统 涡轮分子泵 10-9 torr 离子泵 10-11 torr 离子源 升华泵 质量分析器 真空系统是任何MS的基础 理想的真空系统是 -高性能 快速 干净 安全可靠 离子检测器 数据采集 储罐进样 储气室、加热器、真空连接系统和分子漏孔 进样系统 探头进样 样品室、玻璃毛细管，探头 离子源 色谱进样（气/液质联用） （气/液）相色谱出口直接导入 质量分析器 注射器进样 离子检测器 毛细管电泳进样 数据采集 1 电子轰击电离(EI) GC/MS 2 化学电离(CI) GC/MS 3 大气压化学电离(APCI) LC/MS 4 快原子/离子轰击(FAB/SIMS )离子源 进样系统 5 等离子体解吸(PD) 6 基质辅助激光解吸电离(MALDI) 7 电喷雾电离(ESI) LC/MS 离子源 8 场致电离 -- Field ionization 9 火花放电 -- Spark source 质量分析器 10 激光电离 -- Laser ionization (LIMS) 11 共振电离—Resonance ionization(RIMS) 12 热电离 -- Thermal ionization (TIMS) 离子检测器 数据采集 Turbo Vtm 离子源 ( API 3200, API 4000, 和 API 5000) 液体进入口 垂直精密调节 旋钮 TIS or APCI 离子探头 水平精密调 节旋钮 辅助气加热 头 两通或三通 喷雾针出口 离子源排气口 APCI电晕针 Turbo VTM 离子源 电喷雾(ESI)离子源工作原理 电喷雾离子化分为三个过程: (液态带电） 1 形成带电小液滴 2 溶剂蒸发和小液滴碎裂 3 最终形成气相离子 离子源的选择---ESI 缺点 优点 ? 在溶液中必须形成离子 ? 适合范围广:分析离子型/极 ? 流动相中缓冲盐的种类和浓 性化合物、难挥发或热不稳 度对灵敏度均有显著影响， 定性化合物 因此流动相的选择非常重要 ? 多电荷离子的形成，可以分 ? 具有流速依赖性 析高分子量化合物 ? 基质抑制现象较为明显 ? 灵敏度高 大气压化学电离源 (APCI) 又叫:加热雾化 源 Heated Nebulizer APCI 三步离子化的过程(气态带电） 1. 溶剂快速蒸发形成气态分子 2. 电晕针放电使离子源内溶剂带电 3. 带电的溶剂离子与组分气态分子发生电荷转移，生 成分子离子 离子源的选择--- APCI 缺点 优点 ? 有可能发生热裂解 ? 有一定挥发性的中等极性或 低极性的小分子化合物 ? 样品需要有一定的挥发性 ? 对溶剂选择、流速和添加物 ? 适合分析分子量小于2000 的依赖性较小 Da 的样品 离子源 3.6e4 Minoxidil TIS Mometasone 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 Time, min 4.0e4 Mometasone APCI Minoxidil 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 Time, min 1 扇形磁场和静电场质量分析器 2 傅里叶变换离子回旋共振 3 飞行时间分析器 4 四极杆分析器 + + 进样系统 + 离子源 _ ^ + + 质量分析器 5 离子阱分析器 离子检测器 数据采集 离子簇在离子通道的运动模式 电压使离子簇以螺旋运动的方式前进